螺旋接种法使用仪器设备为螺旋接种仪,由于其自动化接种效率高,目前在微生物实验室中的应用日趋广泛,螺旋接种仪进口品牌有interscience公司发明的easySpiral Dilute和easySpiral Pro,美国生产的LM-AP5000型螺旋接种仪,国产品牌有江雪的Quickprepare型微生物螺旋接种仪和广州深华提供的Spiral全自动细菌螺旋接种仪等。现举例介绍螺旋接种仪标准操作程序。
1.产品厂家及型号
厂家：法国Interscience公司,型号：easySpiral Dilute螺旋接种仪。
2.产品特点
2.1 从清洗,取样到接种的整个过程仅需25 s。
2.2 独特的溢流清洗消毒系统(专利),可有效杜绝交叉污染。
2.3 USB接口可实现软件体积编程10～1000μl和结果的可追溯性(专利)。
2.4 最多可实现30～107 CFU/mL原始样品,无须稀释即可直接接种。
2.5 精密式柱塞泵最大1000μl,可实现4个培养皿连续接种。
2.6 最多可节省3/4的耗材使用,节省时间和培养箱空间。
2.7 带梯度稀释可同时实现手工与自动两种接种方式。
3.主要参数
3.1 可自动接种55 mm,90 mm和150 mm培养皿。
3.2 具有指数接种模式、均一模式、循环模式和倾倒模式,其中55 mm仅有均一和注入模式。
3.3 一次接种量可选择50μl、100μl或200μl,通过软件可编程选择接种容量10～1000μl。
3.4 至多可连续接种20个培养皿(50μl),提高批量处理的效率。
3.5 螺旋接种可允许原始样品浓度107 CFU/mL,可直接接种,无须稀释。
3.6 带有自动样品预稀释功能,可提供10-5 CFU/mL稀释倍数,与螺旋接种配合,可实现浓度10-12 CFU/mL原始样品进行接种工作。
3.7 专利溢流式的接种头清洗系统,可杜绝样品间的交叉污染。
3.8 接种头清洗、吸样、接种可由微处理器控制全自动、半自动或手动完成。
3.9 2L消毒液可消毒600次。
3.10 可通过USB轻松连接电脑,通过软件设定接种参数,具有可追溯性。
3.11 不锈钢材质,结构紧凑,坚固耐用,易清洁。
3.12 内置式清洗用电子真空双泵。
3.13 接种针为插拔式,更换无须任何工具。
3.14 配置：无菌样品杯1000个,测试用染液一瓶,消毒剂一瓶,可连接高压瓶件3个(需本地配置可高压灭菌瓶),使用手册,90&150 mm培养皿盘,90&150 mm计数格栅,CD软件,USB连接线。选配：2L G45瓶子3个(必配),防护罩。
4.操作程序
4.1 样品准备：允许琼脂中接种溶液或悬浮液中含有微生物的浓度应在300到1×105 CFU/mL之间;允许琼脂中接种溶液或悬浮液中含有微生物的浓度应在30到1×107 CFU/mL之间。
4.2 培养皿的选择和标注,为了在easySpiral®上得到最适宜的接种,装有培养基的培养皿要完全平整、培养基不要出现不完整性(起泡,表面有杂物,脱水裂开)、没有过多的湿气(有水滴在培养基表面)、培养基温度必须在室温。
4.3 不同的接种设置,在Spiral®上接种的步骤设置如下：
按
键打开电源→选择接种模式→选择培养皿规格(90 mm或150 mm),注意使用正确的转盘底座→选择需要的清洁方式(NORMAL或LONG)→指定接种体积(50μl、100μl、200μl或USB编程方式)→选择接种的培养皿数量→检查运行过程中消毒剂或无菌水的量是否足够
将样品放置于无菌烧杯中后放于样品盘上→把培养皿放在转盘上→接种样品→清洗金属管道。(www.xing528.com)
4.4 接种模式的选择
在easySpiral ®pro上有三种接种模式可以选择设定加样时间和加样量。
4.4.1 指数接种模式
样品接种量：以指数模式递减。利用NFV 08-100标准,使用标准的接种方法接种。
4.4.2 循环接种模式
样品接种量：以减函数的方式接种。该法更有利于计数。
4.4.3 均一模式
样品接种：在整个螺旋接种过程中,样品以均一的体积接种至培养基表面。easySpiral®及easySpiral ®pro的接种时间见表2-15。
表2-15 easySpiral®及easySpiral ®pro的接种时间
4.5 手动、自动模式的设置
4.5.1 手动模式：按顺序按“CLEAN”、”FILL”、“PLATE”键。
4.5.2 自动模式：
按“ALL”键。USB编程接种体积。螺旋接种仪置于待机模式→打开easySpiral软件→插入USB线→输入接种体积,点击send→拔掉USB线→在螺旋接种仪DepositionVolume处选择USB Prog→开始接种。
4.6 选择培养皿规格
4.6.1 easySpiral®：只可使用90 mm一种规格的培养皿,因此只需直接将90 mm的培养皿放在转盘底座上。
4.6.2 easySpiral ®pro：默认设置是90 mm培养皿转盘底座,可直接放置于90 mm培养皿上。如果要换成150 mm规格的培养皿,则需要按”PETRI DISH SIZE”键,然后更换150 mm的转盘底座,再将需要接种的150 mm规格的培养皿放在转盘底座上。
4.7 接种管清理程序
4.7.1 接种管必须在样品间进行消毒。按CLEAN键就可以开始进行接种管清理程序。
4.7.2 当接种量随样品浓度逐渐增加时,同一种样品不需要执行清洗程序。每隔一个月或根据使用情况,需使用“MONTHLY CLEAN”键进行彻底的清洁消毒。进行此程序时,使用随机附带的清洁剂进行清洗。将清洁剂稀释至10%的浓度,并灌装至有GL45接口的瓶中,连接到主机的消毒剂接口,无菌水瓶可不使用。
4.8 接种管清洗模式的选择
easySpiral ®pro特有的功能：根据使用情况和样品情况,用户可在“CLEANING”面板处用两种模式清洗接种管,一种是“normol”模式,一种是“long”模式。清洗根据用户所使用的瓶子大小,清洗体积不同。使用2L瓶子时的清洗体积见表2-16。
表2-16 使用2L瓶子时的清洗体积
为更方便的清洁主机,可将转盘底座、样品盘及消毒单元向上取出。
4.9 吸样：按“FILL”键开始吸样,吸样的体积与需要接种的培养皿数量以及每个培养皿中接种的量有关。(easySpiral ®Pro可通过控制软件对需要的样品体积进行编程,通过设置体积为“USB Prog”可实现此功能。)若需要接种更多培养皿,再次按“FILL”键吸样。注意：吸样体积不超过500μL(如果在控制软件中设置了超过500μL的吸样体积,则将再次吸样并接种,因此须在转盘底座上再次放置相同的培养皿。)
4.10 接种悬液至琼脂平板：接种将按照设定的体积,以指数递减方式、同心圆的方式或均一模式(仅easySpiral ®Pro可用)在琼脂平板上进行。
5.设备图片
图2-26 easySpiral Dilute螺旋接种仪
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