微生物检验样品采集方法与要求

(一)食品微生物检验采样

食品卫生细菌学检验的目的,是要对食品进行细菌学卫生评价。这就要求检验人员在求实的精神下,科学地进行被检对象的采样、样品送检、检样处理、检验以及报告。在整个过程中,不得掺杂检验人员的丝毫主观臆想和工作上的半点马虎,要有章可依地进行检验和报告。

1.样本采集

在食品的检验中,所采样品必须有代表性,即所取样品能够代表食品的所有部分。食品的加工批号、原料情况(来源、种类、地区、季节等)、加工方法、运输、保藏条件、销售中的各个环节(例如有无防蝇、防污染、防蟑螂及防鼠等设备)及销售人员的责任心和卫生认识水平等无不影响着食品卫生质量。因此,要根据一小份样品的检验结果去说明一大批食品的卫生质量或一起食物中毒的性质,就必须周密考虑,设计出一种科学的取样方法。在食品的检验中,所采样品必须有代表性,即所取样品能够代表食品的所有部分。食品的加工批号、原料情况(来源、种类、地区、季节等)、加工方法、运输、保藏条件、销售中的各个环节(例如有无防蝇、防污染、防蟑螂及防鼠等设备)及销售人员的责任心和卫生认识水平等无不影响着食品卫生质量。因此,要根据一小份样品的检验结果去说明一大批食品的卫生质量或一起食物中毒的性质,就必须周密考虑,设计出一种科学的取样方法。

(1)采样基本要求

1)样品种类样品可分大样、中样、小样三种。大样是指一整批样品;中样是指从样品各部分取得的混合样品,定型包装及散装食品均采样250 g;小样系指分析用的样品,又称为检样,检样一般为25 g。

2)采样方法采样必须在无菌操作下进行。采样用具如探子、铲子、匙、采样器、剪子、镊子、开罐器、广口瓶、试管、刀子等必须是灭菌的。

(2)各类样品采样要求

根据样品种类,如袋装、瓶装或罐装食品,应采完整的未开封的样品;如果样品很大,则需用无菌采样器采集样品;固体粉末样品,应边取边混合;液体样品通过振摇混匀;检样是冷冻食品,应保持冷冻状态(可放在冰内、冰箱的冰盒内或低温冰箱内保存),非冷冻食品需在0℃～5℃中保存。

1)液体样品的采样将样品充分混匀,无菌操作开启包装,用100 mL无菌注射器抽取,放入无菌容器。

2)半固体样品的采样无菌操作开启包装,用灭菌勺子从几个部位挖取样品,放入无菌容器。

3)固体样品的采样大块整体食品应用无菌刀具和镊子从不同部位取样,应兼顾表面和深度,注意样品代表性;小块大包装食品应从不同部位的小块上切取样品,放入无菌容器。样品是固体粉末,应边取样边混合。

4)冷冻食品的采样大包装小块冷冻食品的采样按小块个体采取;大块冷冻食品可以用无菌刀从不同部位削取样品或用无菌小手锯从冻块上锯取样品,也可以用无菌钻头钻取碎样品,放入无菌容器。(注：固体样品和冷冻食品取样还应注意检验目的,若需检验食品污染情况,可取表层样品;若需检验其品质情况,应再取深部样品)

5)生产工序监测采样

①车间用水：自来水样从车间各水龙头上采取冷却水,汤料从车间容器不同部位用100 mL无菌注射器抽取。

②车间台面、用具及加工人员手的卫生监测：用板孔5 cm2的无菌采样板及5支无菌棉签擦拭25 cm2面积。若所采表面干燥,则用无菌稀释液湿润棉签后擦拭,若表面有水,则用干棉签擦拭,擦拭后立即将棉签头用无菌剪刀剪入盛样容器。

③车间空气采样：将5个直径90 mm的普通营养琼脂平板分别置于车间的四角和中部,打开平皿盖5min,然后盖上平板盖送检。

6)食物中毒微生物检验的取样当怀疑发生食物中毒时,应及时收集可疑中毒源食品或餐具等,同时收集病人的呕吐物、粪便或血液等。

7)人畜共患病原微生物检验的取样当怀疑某一动物产品可能带有人畜共患病病原体时,应结合畜禽传染病学的基础知识,用取病原体最集中、最易检出的组织或体液送检验室检验。

采样数量根据不同的食品种类,采样数量有所不同,具体根据检验目的参照相关标准要求执行。采样标签采样前或后应立即贴上标签,每件样品必须标记清楚,如品名、来源、数量、采样地点、采样人及采样时间(年、月、日)。

2.送检

采样后,在检样送检过程中,要尽可能保持检样原有的物理和微生物状态,不要因送检过程而引起微生物的减少或增多。为此可采取以下措施：

(1)无菌方法采样后,所装样品的容器要无菌,装样后尽可能密封,以防止环境中的微生物进一步污染。

(2)进行微生物检验的样品,送达实验室要越快越好,一般不应超过3 h。若路途遥远,可将不需冷冻的样品,保持在1℃～5℃环境中送检,可采用冰桶等装置;若需保持在冷冻状态(如已冻结的样品),则需将样品保存在泡沫塑料隔热箱内,箱内可置干冰,使温度维持在0℃以下,或采用其他冷藏设备。

(3)送检样品不得加入任何防腐剂。

(4)水产品因含水分较多,体内酶的活力较旺盛,易于变质。因此,采样后应在3 h内送检,在送检途中一般都应加冰保存。

(5)对于某些易死亡病原菌检验的样品,在运送过程中可采用运送培养基。如进行小肠结肠炎耶氏菌、空肠弯曲菌等菌检验的送检样,可插于Cary-Blair氏运送培养基中送检。检样在送检时除注意上述事项外,还要标注适当的标记并填写微生物检验特殊要求的送检申请单。其内容包括：样品的描述,采样者的姓名,制造者的名称和地址,经营者或供销者,采样的日期、时间和地点,采样时的温度和环境湿度,采样的原因是为了质量的监督或计划监测,还是为了食物传播性疾病的调查。

(二)水质微生物采样

1.采样计划

采样前应根据水质检验目的和任务制定采样计划,内容包括：采样目的、检验指标、采样时间、采样地点、采样方法、采样频率、采样数量、采样容器与清洗、采样体积、样品保存方法、样品标签、现场测定项目、采样质量控制、运输工具和条件等。

2.采样容器

(1)应根据待测组分的特性选择合适的采样容器。

(2)容器的材质应化学稳定性强且不应与水样中组分发生反应,容器壁不应吸收或吸附待测组分。

(3)采样容器应可适应环境温度的变化,抗震性能强。

(4)采样容器的大小、形状和重量应适宜,能严密封口,并容易打开,且易清洗。

(5)应尽量选用细口容器,容器的盖和塞的材料应与容器材料统一。

(6)对微生物学指标测定水样应使用玻璃材质的采样容器。

(7)微生物学指标测定水样可使用酶底物法配套采样瓶。

3.采样容器的洗涤

(1)将重复使用采样容器用自来水和洗涤剂洗涤,并用自来水彻底冲洗后用质量分数为10%的盐酸溶液浸泡过夜,然后依次用自来水、蒸馏水洗净。

(2)容器灭菌：热力灭菌是最可靠且普遍应用的方法。热力灭菌分干热和高压蒸气灭菌两种。干热灭菌要求160℃下维持2 h;高压蒸气灭菌要求121℃下维持15 min,高压蒸汽灭菌后的容器如不立即使用,应于60℃将瓶内冷凝水烘干。灭菌后的容器应在2周内使用。

4.水样采集

(1)微生物学指标

同一水源、同一时间采集几类检测指标的水样时,应先采集供微生物学指标检测的水样。采样时应直接采集,不得用水样涮洗已灭菌的采样瓶,并避免手指和其他物品对瓶口的沾污。

(2)采样时不可搅动水底的沉积物。

(3)水源水的采集

1)水源水是指集中式供水水源地的原水。

2)水源水采样点通常应选择汲水处。

3)表层水

在河流、湖泊可以直接汲水的场合,可用适当的容器如水桶采样。从桥上等地方采样时,可将系着绳子的桶或带有坠子的采样瓶投入水中汲水。注意不能混入漂浮于水面上的物质。(www.xing528.com)

4)一定深度的水

在湖泊、水库等地采集具有一定深度的水时,可用直立式采水器。这类装置是在下沉过程中水从采样器中流过。当达到预定深度是容器能自动闭合而汲取水样。在河水流动缓慢的情况下使用上述方法时最好在采样器下系上适宜质量的坠子,当水深流急时要系上相应质量的铅鱼,并配备绞车。

5)泉水和井水

对于自喷的泉水可在涌口处直接采样。采集不自喷泉水时,应将停滞在抽水管中的水汲出,新水更替后再进行采样水质检测。从井水采集水样,应在充分抽汲后进行,以保证水样的代表性。

6)出厂水的采集

出厂水是指集中式供水单位水处理工艺过程完成的水。出厂水的采样点应设在出厂进入输送管道以前处。

7)末梢水的采集

末梢水是指出厂水经输水管网输送至终端(用户水龙头)处的水。末梢水的采集：应注意采样时间。夜间可能析出可沉渍于管道的附着物,取样时应打开龙头放水数分钟,排出沉积物。采集用于微生物学指标检验的样品前应对水龙头进行消毒。

8)二次供水的采集

二次供水是指集中式供水在入户之前经再度储存、加压和消毒或深度处理,通过管道或容器输送给用户的供水方式。二次供水的采集：应包括水箱(或蓄水池)进水、出水以及末梢水。

9)分散式供水的采集

分散式供水是指用户直接从水源取水,未经任何设施或仅有简易设施的供水方式。分散式供水的采集应根据实际使用情况确定。

5.采样体积

微生物检验取样量为500 mL,每125 mL水样加入0.1 mg硫代硫酸钠除去余氯。

6.水样保存

水样在4℃冷藏保存,贮存于暗处。水样采集后应尽快测定。微生物项目测定应在4 h内完成。

7.样品管理和运输

(1)样品管理

水样微生物检测都需要运回实验室进行分析,在水样的运输和实验室管理过程中应保证其性质稳定、完整、不受污染、损坏和丢失。实验室测试样品：应认真填写采样记录或标签,并粘贴在采样容器上,注明水样编号、采样者、日期、时间及地点等相关信息。在采样时还应记录所有野外调查的采样情况,包括采样目的、采样地点、样品种类、编号、数量,样品保存方法及采样时的气候条件等。

(2)样品运输

1)水样采集后应立即送回实验室,根据采样点的地理位置和各项目的最长可保存时间选用适当的运输方式,在现场采样工作开始之前就应安排好运输工作,以防延误。

2)样品装运前应逐一与样品登记表、样品标签和采样记录进行核对,核对无误后装箱。

3)玻璃瓶要塞紧磨口塞,并用细绳将瓶塞与瓶颈拴紧,或用封口胶、石蜡封口。

4)应配备专门的隔热容器,并放入制冷剂。

5)冬季应采取保温措施,以防样品瓶冻裂。

6)为防止样品在运输过程中因震动、碰撞而导致损失或沾污,最好将样品装箱运输。装运用的箱和盖都需要用泡沫塑料或瓦楞纸板作衬里或隔板,并使箱盖适度压住样品瓶。

7)样品箱应有“切勿倒置”和“易碎物品”的明显标识。

(三)公共场所微生物采样

1.公共场所空气中微生物现场采样的基本要求

撞击法采集空气中微生物：

1)室内面积不足50 m2的设置1个采样点,50 m2～200 m2的设置2个采样点,200 m2以上的设置3个～5个采样点。

2)采样点按均匀布点原则布置,室内1个采样点的设置在中央,2个采样点的设置在室内对称点上,3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上,5个采样点的按梅花布点,其他的按均匀布点原则布置。

3)采样点距离地面高度1.2 m～1.5 m,距离墙壁不小于1 m,采样点应避开通风口、通风道等。

2.公共场所公用品用具中微生物采样要求

1)随机抽取清洗消毒后准备使用的公共用品用具,无菌操作,使用灭菌干燥棉拭子,于10 mL灭菌生理盐水内浸润(吸取约1 mL溶液)后,在用品用具的适当部位来回均匀涂抹进行样品采集,再用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分,将棉拭子放人剩余的9 mL生理盐水内,4 h内送检。

2)在茶具内、外缘与口唇接触处,即1 cm～5 cm高处一圈采样,采样总面积为50 cm2。

3)在毛巾、枕巾、浴巾对折后两面的中央5 cm×5 cm(25 cm2)面积范围内分别均匀涂抹5次,每25 cm2采样面积为1份样品,每件用品共采集2份样品。

4)在床单、被单的上下两部即与颈部、脚部接触部位5 cm×5 cm(25 cm2)面积范围内分别均匀涂抹5次,每25 cm2采样面积为1份样品,每件用品共采集2份样品。

5)睡衣、睡裤随机选择2个5 cm×5 cm(25 cm2)面积范围内分别均匀涂抹5次,每25 cm2采样面积为1份样品,每件用品共采集2份样品。

6)浴盆：在盆内一侧壁二分之一高度及盆底中央5 cm×5 cm(25 cm2)范围内分别涂抹采样,每25 cm2采样面积为1份样品,每件用具共采集2份样品。

7)脸(脚)盆：在盆内二分之一高度相对两侧壁5 cm×5 cm(25 cm2)范围内分别涂抹采样,每25 cm2,采样面积为1份样品,每件用具共采集2份样品。

8)坐便器：在坐便圈前部弯曲处选择2个5 cm×5 cm(25 cm2)范围内分别涂抹采样,每25 cm2采样面积为1份样品,每件用具共采集2份样品。

9)按摩床(椅)：在床(椅)面中部选择2个5 cm×5 cm(25 cm2)范围内分别涂抹采样,每25 cm2采样面积为1份样品,每件用具共采集2份样品。

10)每只鞋的鞋内与脚趾接触处5 cm×5 cm面积范围内分别均匀涂抹5次,1双鞋为1份样品,采样总面积为50 cm2。

11)理发推子：应在推子的前部上下均匀各涂抹3次,采样面积达到25 cm2为1份样品。

12)理发刀、剪：在刀、剪两面各涂抹1次,采样面积达到25 cm2为1份样品。

13)美容美甲用品：与人体接触处涂抹采样,采样面积达到25 cm2为1份样品。

14)修脚工具：在修脚工具与人体接触处涂抹采样,采样面积达到50 cm2为1份样品。