玻璃器皿实验的注意事项

(一)玻璃器皿的种类、清洗要求与方法

食品微生物学实验室所用的玻璃器皿,大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物,因此对其质量、洗涤和包装方法有严格的要求。一般,玻璃器皿的质量要求硬质玻璃,才能承受高温和短暂烧灼而不致破损;器皿的游离碱含量要少,否则会影响培养基的酸碱度;对玻璃器皿的形状和包装方法的要求,以能防止污染杂菌为准;洗涤方法不当也会影响实验结果。现将食品微生物检验常用的玻璃器皿做如下分述。

1.试管

微生物学实验室所用玻璃试管,其管壁必须比化学实验室用的厚些,这样在塞棉花塞时,管口才不会破损。试管的形状要求没有翻口,不然,微生物容易从棉塞与管口的缝隙间进入试管而造成污染。此外,现在有不用棉塞而用铝制或塑料制的试管帽及硅胶塞,若用翻口试管也不便于盖试管帽。有的实验要求尽量减低蒸发试管内的水分,则需使用螺口试管,盖以螺口胶木或塑料帽。试管的大小可根据用途的不同,准备下列三种型号,试管要求管壁坚厚,管直而口平。常用试管有以下规格。

(1)大试管(约18×180 mm)可盛倒培养皿用的培养基;亦可作制备琼脂斜面用(需要大量菌体时用)。

(2)中试管(约13～15×100～150mm)盛液体培养基或做琼脂斜面用,亦可用于病毒等的稀释和血清学试验。

(3)小试管(10～12×100mm)一般用于糖发酵试验或血清学试验,和其他需要节省材料的试验。

2.德汉氏试管

观察细菌在糖发酵培养基内产气情况时,一般在小试管内再套一倒置的小套管(约6×36 mm),此小套管即为德汉氏试管,又称发酵小套管。常将小玻璃管倒置于含糖液的培养基试管内。

3.刻度吸管

简称吸管(又称移液管),用于准确吸取少量液体,其壁上有精细刻度。

(1)玻璃吸管

微生物学实验室一般要准备1 mL、2 mL、5 mL、10 mL的刻度玻璃吸管;另做某些血清学试验常用0.1 mL、0.2 mL、0.25 mL、0.5 mL等容量的吸管。

与化学实验室所用的不同,其刻度指示的容量往往包括管尖的液体体积,亦即使用时要注意将所吸液体吹尽,故有时称为“吹出”吸管。市售细菌学用吸管,有的在吸管上端刻有“吹”字。除有刻度的吸管外,有时需用不计量的毛细吸管,又称滴管,来吸取动物体液和离心上清液以及滴加少量抗原、抗体等。

(2)活塞吸管

主要用来吸取微量液体,故又称微量吸液器或微量加样器。其特点是容量固定,使用时不用观察刻度,操作方便、迅速。国内产品一般每个活塞吸管固定一种容量,分别有5μl、10μl、20μl、25μl、50μl、100μl、200μl、500μl、1000μl等不同容量。而精制的活塞吸管每个在一定的范围内可调节几个容积,例如在5～25μl的范围内,可调节5μl、10μl、15μl、20μl、25μl五个不同的量,使用时按需要调节,但当调节固定后,每吸一次,容量仍是固定的。用毕只需调换吸嘴或将吸嘴洗净,消毒后再行使用。活塞吸管是国外70年代后半期才开始生产与应用的,近年来国内亦日益广泛应用于免疫学和使用同位素等的科学实验中。

4.培养皿

主要用于细菌的分离培养。常用培养皿有50 mm(皿底直径)×10 mm(皿底高度),75 mm×10 mm,90 mm×10 mm和100 mm×10 mm等几种规格。活菌计数一般用90 mm×10 mm规格。

培养皿一般均为玻璃皿盖,但有特殊需要时,可使用陶器皿盖,因其能吸收水分,使培养基表面干燥,例如测定抗生素生物效价时,培养皿不能倒置培养,则用陶器皿盖为好。在培养皿内倒入适量固体培养基制成平板,用于分离、纯化、鉴定菌种、微生物计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。

5.三角烧瓶与烧杯

多用于储存培养基和生理盐水、无菌水、培养基和摇瓶发酵等,有50 mL、100 mL、150 mL、200 mL、250 mL、300 mL、500 mL、1000 mL、2000 mL、3000 mL等多种规格。其底大口小,便于加塞,放置平稳。

常用的烧杯有50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml等,用来配制培养基与药品。

6.注射器

一般有1mL、2mL、5mL、10mL、20mL、50 mL等不同容量的注射器。注射抗原于动物体内可根据需要使用1mL、2和5mL的;抽取动物心脏血或绵羊静脉血可采用10mL、20mL、50mL的。微量注射器有10μl、20μl、50μl、100μl等不同的大小。一般在免疫学或纸层析等实验中滴加微量样品时应用。

7.载玻片与盖玻片

普通载玻片大小为75×25 mm,用于微生物涂片、染色,作形态观察等。盖玻片为18×18 mm。凹玻片是在一块厚玻片的当中有一圆形凹窝,作悬滴观察活细菌以及微室培养用。

8.双层瓶

由内外两个玻璃瓶组成,内层小锥形瓶盛放香柏油,供油镜头观察微生物时使用,外层瓶盛放二甲苯,用以擦净油镜头。

9.滴瓶

用来装各种染料、生理盐水等。

10.试剂瓶

磨口塞试剂瓶分广口和小口,容量30～1000 mL不等。视储备试剂量选用不同大小的试剂瓶。有棕色和无色两种,盛储避光试剂时用棕色的。

11.玻璃缸

用来盛放石炭酸或来苏水等消毒剂,以备浸泡用过的载玻片、盖玻片、吸管等。

12.玻璃棒

直径3～5 mm的玻璃棒,做搅拌液体或标本支架用。

13.玻璃珠

常用中性硬质玻璃制成,直径3～4 mm和5～6 mm,用于血液脱纤维或打碎组织、样品和菌落等。

14.滴瓶

滴瓶有橡皮帽式、玻塞式,有棕色和无色,容量有30 mL或60 mL等不同规格,储存试剂用。

15.玻璃漏斗

分短颈和长颈两种。常用口径为60～150 mm,分装溶液或过滤用。

16.载玻片、凹玻片及盖玻片

载玻片供作涂片用,凹玻片供制作悬滴标本和血清学检验用。标准盖玻片厚度为0.17 mm,用于覆盖载玻片和凹玻片上的标本。

17.注射器及大小针头

50～100 mL的大型注射器,多用于采血;1～20 mL的注射器供作动物试验和其他检验工作用。

18.接种工具

有接种环、接种针、接种钩、接种铲、玻璃涂布器等。制造环、针、钩、铲的金属可用铂或镍,原则是软硬适度,能经受火焰反复烧灼,又易冷却。接种细菌和酵母菌用接种环和接种针,其铂丝或镍丝的直径以0.5 mm为适当,环的内径约2 mm,环面应平整。接种某些不易和培养基分离的放线菌和真菌,有时用接种钩或接种铲,其丝的直径要求粗一些,约1 mm。用涂布法在琼脂平板上分离单个菌落时需用玻璃涂布器,是将玻棒弯曲或将玻棒一端烧红后压扁而成。

(二)微生物玻璃器皿的清洗、包装及灭菌

清洁的玻璃器皿是得到正确的实验结果的先决条件,为了保证微生物实验顺利进行,保证实验结果的准确性,不影响实验进度和实验结果,必须把所用器皿彻底清洗干净。清洗的目的就在于除去玻璃器皿上的污垢(灰尘、油污、无机盐等物质),使其不能妨碍得到正确的实验结果。清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。

1.洗涤剂的种类(www.xing528.com)

水、洗衣粉、柠檬洗涤剂、肥皂、化学洗液。

(1)洗涤液的配制

洗涤液分浓溶液与稀溶液两种,配方如下：

浓溶液：重铬酸钠或重铬酸钾(工业用)50 g+自来水150 mL+浓硫酸(工业用)800 mL;

稀溶液：重铬酸钠或重铬酸钾(工业用)50 g+自来水850 mL+浓硫酸(工业用)100 mL;

原理是重铬酸钠或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸,酪酸的氧化能力极强,因而此液具有极强的去污作用。配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中,可慢慢加温,使溶解,冷却后徐徐加入浓硫酸,边加边搅动。配好后的洗涤液应是棕红色或橘红色,贮存于有盖容器内。

(2)洗液使用注意事项

1)洗涤液中的硫酸具有强腐蚀作用,玻璃器皿浸泡时间太长,会使玻璃变质,因此切忌到时忘记将器皿取出冲洗。其次,洗涤液若沾污衣服和皮肤应立即用水洗,再用苏打水或氨液洗。如果溅在桌椅上,应立即用水洗去或湿布抹去。

2)玻璃器皿投入前,应尽量干燥,避免洗涤液稀释。

3)此液的使用仅限于玻璃和瓷质器皿,不适用于金属和塑料器皿。

4)有大量有机质的器皿应先行擦洗,然后再用洗涤液,这是因为有机质过多,会加快洗涤液失效,此外,洗涤液虽为很强的去污剂,但也不是所有的污迹都可清除。

5)盛洗涤液的容器应始终加盖,以防氧化变质。

6)洗涤液可反复使用,但当其变为墨绿色时即已失效,不能再用。

2.玻璃器皿清洗要求与方法

通常清洗方法有三种,一是机械清洗方法,即用铲、刮、刷等方法清洗;二是化学清洗方法,即用各种化学去污溶剂清洗;三是超声清洗法,通过超声振动破坏污物与清洗件表面的吸附,从而达到清洗的目的。

具体的清洗方法要依污垢附着表面的状况及污垢的性质决定,现分述如下：

(1)新玻璃器皿的洗涤方法

新购置的玻璃器皿(包括载玻片、盖玻片、试管、吸管、平皿、三角瓶等)含有游离碱,应用2%的盐酸溶液浸泡数小时,以中和其碱质,再用清水充分冲洗干净。

(2)使用过的玻璃器皿的洗涤方法

1)一般的三角瓶、培养皿、试管、烧杯等可用毛刷或海绵蘸洗涤剂或去污粉、肥皂等洗涤剂刷洗去灰尘、油污、无机盐等物质,然后用自来水冲洗干净。热的肥皂水去污能力更强,可有效地洗去器皿上的油污。洗衣粉和去污粉较难冲洗干净而常在器壁上附有一层微小粒子,故要用水多次甚至10次以上充分冲洗,或可用稀盐酸摇洗一次,再用水冲洗,然后倒置于铁丝框内或有空心格子的木架上,在室内晾干。急用时可盛于框内或搪瓷盘上,放烘箱烘干。玻璃器皿经洗涤后,若内壁的水是均匀分布成一薄层,表示油垢完全洗净,若挂有水珠,则还需用洗涤液浸泡数小时,然后再用自来水充分冲洗。如果器皿要盛高纯度的化学药品或者做较精确的实验,可先在洗液中浸泡过夜,再用自来水冲洗,最后用蒸馏水洗2～3次。洗刷干净的玻璃器皿烘干备用。

2)含有琼脂培养基的玻璃器皿的洗涤法：装有固体培养基的器皿应先用小刀或镊子、玻璃棒将器皿中的琼脂培养基刮下。如果琼脂培养基已经干燥,可将器皿放在少量水中煮沸,使琼脂熔化后趁热倒出,然后用水洗涤,并用刷子沾洗涤剂擦洗内壁,以除去粘污在壁上的灰尘和油垢,用洗衣粉水洗去油污,然后用自来水冲洗。洗好后的器皿应倒置晾干或置于干燥箱中干燥至无水滴。如果器皿上沾有蜡或油漆等物质,可用加热的方法使之熔化后揩去,或用有机溶剂(苯、二甲苯、丙酮等)擦拭;如器皿沾有焦油、树脂等物质,可用浓硫酸或40%氢氧化钠溶液浸泡,也可用洗涤液浸泡。

3)带病原菌的培养物必需先行高压蒸汽灭菌,趁热倒出容器内的培养物,再用热的洗涤剂溶液洗刷干净,再进行洗涤。

4)染菌的移液管和毛细吸管,使用后应立即放入5%的石炭酸溶液中浸泡24h或先高压灭菌,然后再冲洗。吸管的内壁如果有油垢,同样应先在洗涤液内浸泡数小时,然后再行冲洗。盛放一般培养基用的器皿经上法洗涤后,即可使用,若需精确配制化学药品,或做科研用的精确实验,要求自来水冲洗干净后,再用蒸馏水淋洗三次,晾干或烘干后备用。

5)玻璃吸管：吸过血液、血清、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管(包括毛细吸管),使用后应立即投入盛有自来水的量筒或标本瓶内,免得干燥后难以冲洗干净。量筒或标本瓶底部应垫以脱脂棉花,否则吸管投入时容易破损。待实验完毕,再集中冲洗。若吸管顶部塞有棉花,则冲洗前先将吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接,用水将棉花冲出,然后再装入吸管自动洗涤器内冲洗,没有吸管自动洗涤器的实验室可用冲出棉花的方法多冲洗片刻。必要时再用蒸馏水淋洗。洗净后,放搪瓷盘中晾干,若要加速干燥,可放烘箱内烘干。

6)移液管、倒管的洗涤方法：新的移液管及倒管先在的5%盐酸溶液中浸1 h,然后用自来水冲洗几次,最后用蒸馏水换洗几次用过的移液管、倒管先用自来水洗去表面的残液,再放在洗衣粉水中浸泡1 h以上,再用自来水冲洗至管内壁无残渣,最后用蒸馏水换洗数次,晾干后入恒温干燥箱中烘干。

7)光学玻璃的清洗：光学玻璃用于仪器的镜头、镜片、棱镜、玻片等,在制造和使用中容易沾上油污、水溶性污物、指纹等,影响成像及透光率。清洗光学玻璃,应根据污垢的特点、不同结构选用不同的清洗剂、清洗工具及清洗方法。载玻片与盖玻片：新载玻片及盖玻片先在20%的盐酸溶液中浸1 h,然后用自来水冲洗2～3次,最后用蒸馏水换洗2～3次。

用过的载玻片与盖玻片：如滴有香柏油,要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次,使油垢溶解,再在1%洗衣粉或肥皂水溶液中煮沸20～30 min(注意溶液一定要浸没玻片,否则会使玻片钙化变质),待冷却后,逐个用自来水洗净,用软布或脱脂棉花擦拭,浸泡于95%的乙醇中备用。使用前,可用干净纱布擦去酒精,并经火焰微热,使残余酒精挥发,再用水滴检查,如水滴在玻片上均匀散开方可使用。用此法洗涤和保存的载玻片和盖玻片清洁透亮,没有水珠。

检查过活菌的载玻片或盖玻片应先在2%煤酚皂溶液或0.25%新洁尔灭溶液中浸泡24 h,然后按上法洗涤与保存。

8)血球计数板的清洗：血球计数板(细菌计数板)使用后应立即在水龙头下用水冲净,必要时可用95%酒精浸泡,或用酒精棉轻轻擦拭,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗涤完毕镜检计数区是否残留菌体或其他沉淀物,若不干净,则必须重复洗涤至洁净为止。洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存。

3.清洗注意事项

(1)任何洗涤方法,都不应对玻璃器皿有所损伤,不能用有腐蚀作用的化学药剂,也不能使用比玻璃器皿硬度大的物品来擦拭玻璃器皿。

(2)一般新的玻璃器皿用2%的盐酸液浸泡数小时后用水冲洗干净。

(3)用过的器皿应立即洗涤,放置太久会增加洗涤困难。

(4)强酸、强碱及其他氧化物和有挥发性的有毒物品,都不能倒在洗涤槽内,以免污染环境水质,必须倒在废水缸中。

(5)含有对人体有传染性病菌的器具,应先煮沸灭菌后再进行洗涤。

(6)难洗涤的器皿不要与易洗涤的器皿放在一起,以免增加洗涤的麻烦。有油的器皿不要与无油的器皿混在一起,否则使本来无油的器皿沾上了油垢,浪费药剂和时间。

(三)空玻璃器皿的包装

1.培养皿的包装

培养皿常用旧报纸密密包紧,一般以5～8套培养皿作一包,少于5套工作量太大,多于8套不易操作。包好后用热灭菌。如将培养皿放入铜筒内进行干热灭菌,则不必用纸包,铜筒有一圆筒形的带盖外筒,里面放一装培养皿的带底框架,此框架可自圆筒内提出,以便装取培养皿。

2.吸管的包装

准备好干燥的吸管,在距其粗头顶端约0.5 cm处,塞一小段约1.5 cm长的棉花,以免使用时将杂菌吹入其中,或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧恰当,过紧,吹吸液体太费力;过松,吹气时棉花会下滑。然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的近左端,与报纸约呈45°,并将左端多余的一段纸覆折在吸管上,再将整根吸管卷入报纸,右端多余的报纸打一小结。如此包好的很多吸管可再用一张大报纸包好,进行干热灭菌。

如果有装吸管的铜筒,亦可将分别包好的吸管一起装入铜筒,进行干热灭菌;若预计一筒灭菌的吸管可一次用完,亦可不用报纸包而直接装入铜筒灭菌,但要求将吸管的尖端插入筒底,粗端在筒口,使用时,铜筒卧放在桌上,用手持粗端拔出。

3.试管和三角烧瓶等的包装

试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞,然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用两层报纸(不可用油纸)与细线包扎好,进行干热灭菌。试管塞好棉花塞后也可一起装在铁丝篓中,用大张报纸将一篓试管口做一次包扎,包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。

(四)玻璃器皿的灭菌

空的玻璃器皿一般用干热灭菌,若需湿热灭菌,则要多用几层报纸包扎,外面最好再加一层牛皮纸。如果试管是盖的铝帽,则不必包纸,可直接干热灭菌。用塑料帽,则宜湿热灭菌。一般使用电热恒温干燥箱,采用干热灭菌法。进行灭菌时,一定要熟悉和遵守前述干燥箱的操作方法和注意事项,严格按照要求进行。一般常用的玻璃器皿,在洗净待干后,才能灭菌。在干燥灭菌器内灭菌常用温度和时间为160℃灭菌2 h。灭菌结束后降温至50℃以下才能取物,以保证安全和防止玻璃器皿的爆裂。

(五)超声清洗设备的应用

超声清洗仪的应用原理是由超声波发生器发出的高频振荡信号,通过换能器转换成高频机械振荡而传播到介质,清洗溶剂中超声波在清洗液中疏密相间的向前辐射,使液体流动而产生数以万计的微小气泡,存在于液体中的微小气泡(空化核)在声场的作用下振动,当声压达到一定值时,气泡迅速增长,然后突然闭合,在气泡闭合时产生冲击波,在其周围产生上千个大气压力,数百度的高温,利用闭合时的爆炸冲击波破坏不溶性污物而使它们分散于清洗液中,当团体粒子被油污裹着而粘附在清洗件表面时,油被乳化,固体粒子即脱离,从而达到清洗件表面净化的目的。相比其他多种的洗净方式,超声波洗净机显示出了巨大的优越性。高效率和高清洁度,得益于其声波在介质中传播时产生的穿透性和空化冲击波。所以很容易将带有复杂外形、内腔和细空的零部件清洗干净,对一般的除油、防锈、磷化等工艺过程,在超声波作用下只需两三分钟即可完成,其速度比传统方法可提高几倍到几十倍,清洁度也能达到高标准,这在许多对产品表面质量和生产率要求较高的场合,更突出地显示了用其他处理方法难以达到或不可取代的结果。超声波洗净机已经被广泛应用于电子器件、半导体硅片、电路板、电镀件、光学镜片、音频磁头、化纤喷丝头、打印机头、医疗器械、玻璃器皿、照相器械、通信器械、金银首饰、精密机械零件的清洗。

在微生物检验工作中玻璃器皿用量大,对洁净度有很高的要求,超声清洗仪无疑是最理想的清洗设备。目前超声清洗仪已被广泛应用于实验室玻璃器皿的清洗,市场上已研发出多种品牌的超声清洗仪,如进口品牌有美国BRANSON、美国Crest、德国Bandelin、德国巴克、德国Elma、意大利IST、英国PRIMA等,国产品牌有洁盟、吉康、威固特、恒波、好顺声等。