微生物实验室功能区划分详解

微生物实验室根据功能可划分为准备室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室五部分组成。

(一)准备室

准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。对于较大的食品微生物实验室可另设洗涤间用于洗刷器皿等。室内应备有加热器、蒸锅,洗刷器皿用的盆、桶等,还应有各种瓶刷、去污粉。

(二)灭菌室

灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌,室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。

(三)无菌室或洁净室

1.培养室的设置

(1)培养室应有内、外两间,内室是培养室,外室是缓冲室。房间容积不宜大,以利于空气灭菌,内室面积在3.2×4.4=14.08m2左右,外室面积在3.2×1.8=5.58m2左右,高以2.5 m左右为宜,都应有天花板。

(2)分隔内室与外室的墙壁上部应设带空气过滤装置的通风口。(3)为满足微生物对温湿度的需要,需安装恒温恒湿机。

(4)内外室都应在室中央安装紫外线灯,以供灭菌用。

2.培养室内设备及用具

内室通常配备各类培养箱、培养架、培养盒。外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、手持喷雾器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。

3.培养室的灭菌、消毒

同无菌室的灭菌、消毒措施。小规模的培养可不启用恒温培养室,而在恒温培养箱中进行。

(四)恒温培养室

无菌室也称接种室,是接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中,菌种的接种移植是一项主要操作,这项操作的特点就是要保证菌种纯种,防止杂菌的污染。在一般环境的空气中,由于存在许多尘埃和杂菌,很易造成污染,对接种工作干扰很大。

1.无菌室的结构设置

无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点：

(1)无菌室应有内、外两间,内间是无菌室,外间是缓冲室。房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5=5 m2,外间面积1×2=2 m2,高以2.5 m以下为宜,都应有天花板。

(2)内间应当设拉门,以减少空气的波动,门应设在离工作台最远的位置上;外间的门最好也用拉门,要设在距内间最远的位置上。

(3)在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上,应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。小窗宽60 cm、高40 cm、厚30 cm,内外都挂对拉的窗扇。

(4)无菌室容积小而严密,使用一段时间后,室内温度很高,故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上(即离工作台最远的位置),最好为双层结构,外层为百叶窗,内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启,以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。

2.无菌室内设备和用具

(1)无菌室内的工作台,不论是什么材质、用途的,都要求表面光滑和台面水平。

(2)在内室和外室各安装一个紫外灯(多为30 W)。内室的紫外灯应安装在经常工作的座位正上方,离地面2 m,外室的紫外灯可安装在外室中央。(www.xing528.com)

(3)外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏儿水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。

(4)内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。

3.无菌室工作规程

(1)无菌室内墙壁应光滑,尽量避免死角,便于洗刷消毒。

(2)应保持密封、防尘、清洁、干燥。操作时尽量避免走动。

(3)室内设备简单,禁止放置杂物。

(4)工作台、地面和墙壁应用新洁尔灭或过氧乙酸溶液擦洗消毒。

(5)无菌室内应备有专用开瓶器、金属勺、镊子、剪刀、接种针、接种环,每次使用前后应在酒精灯火焰上烧灼灭菌。

(6)杀菌前做好一切准备工作,然后用紫外线杀菌灯进行空气消毒。开灯照射30min后方可进入室内工作。

(7)无菌室内应备有盛放3%来苏水或5%石炭酸溶液的玻璃缸,内浸纱布数块;备有75%酒精棉球,用于样品表面消毒及意外污染消毒;无菌室每次使用前后,用紫外灯照射。

(8)工作中应注意安全。如遇棉塞着火,用手紧握或用湿布包裹熄灭,切勿用嘴吹,以免扩大燃烧;如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时,应用浸润5%石炭酸的抹布包裹后,并用浸润5%石炭酸的抹布擦拭台面或地面,用酒精棉球擦手后再继续操作。

(9)根据无菌室的净化情况和空气中含有的杂菌种类,可采用不同的化学消毒剂。如果霉菌较多,先用5%石炭酸全面喷洒室内,再用甲醛熏蒸;如果细菌较多,可采用甲醛与乳酸交替熏蒸。一般情况下,也可酌情间隔一定时间用2 mL/m3甲醛溶液或20 mL/m3丙二醇溶液熏蒸消毒。

4.无菌室的熏蒸消毒

(1)熏蒸：这是无菌室彻底灭菌的措施。无菌室使用了较长时间,污染比较严重时,应进行熏蒸灭菌,主要采取甲醛熏蒸消毒法,方法如下：

1)加热熏蒸按熏蒸空间计算量取甲醛溶液,盛在小铁筒内,用铁架支好,在酒精灯内注入适量酒精,将室内各种物品准备妥当后,点燃酒精,关闭门窗,任甲醛溶液煮沸挥发。酒精灯内酒精的量最好能在甲醛溶液蒸发完后即自行熄灭。

2)氧化熏蒸准备一瓷碗或玻璃容器,称取高锰酸钾(甲醛用量的1/2)倒入,另外量取定量的甲醛溶液,室内准备妥当后,把甲醛溶液倒在盛有高锰酸钾的器皿内,立即关门。几秒钟后,甲醛溶液即沸腾而挥发。高锰酸钾是一种强氧化剂,当它与一部分甲醛溶液作用时,由氧化作用产生的热可使其余的甲醛溶液挥发为气体。熏蒸后关门密闭应保持12 h以上。甲醛溶液熏蒸对人的眼、鼻有强烈刺激,在一定时间内不能入室工作。为减轻甲醛对人的刺激作用,熏蒸后12 h,再量取与甲醛溶液等量的氨水,迅速放入室内,同时敞开门窗放出剩余的有刺激性的气体。

(2)喷雾：在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降,防止桌面、地面上的微尘飞扬,并有杀菌作用。可用5%石炭酸喷雾。

(3)紫外线照射：在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的杀菌效果。通常应开启紫外线灯照射30～60 min。

5.无菌室无菌程度的测定

一般采用平板法测定无菌室的无菌程度。

(1)将已灭菌的营养琼脂培养基分别倒入已灭过菌的培养皿内,每皿约15 mL培养基,启开皿盖暴露于无菌室内的不同地方,30 min后,盖好皿盖。

(2)将培养皿倒置,于37℃培养48 h后,观察菌落情况,统计菌落数。

(3)如果每一个培养皿内菌落不超过4个,则可以认为无菌程度良好,若菌落数很多,则应再重复以上步骤,进一步对无菌室进行灭菌。