获得UV-11糖化菌诱变株的方法优化

中国科学院微生物研究所采用土壤中分离所得Asp.niger202 作为出发菌株，经Co60、紫外线、亚硝基胍等物理、化学诱变因子交替处理，最后获得AS 3.4309 变异株，比原菌株202 产糖化酶能力提高8.3 倍。

（一）诱变株AS 3.4309 菌落形态特征

该菌在察氏平板上，于32℃培养12d，菌落生长呈扩散形，直径可达5.5～6.5cm，菌丝初为白色，有时出现黄色区域，绒状，有明显的辐射状皱纹，无渗出液，边缘生长较薄，有霉味，咖啡色，反面为浅黄色。

分生孢子头幼时呈球形，大部分直径为140～168μm，老时裂开成3～4 瓣，一般直径为250～28μm、褐色。分生孢子梗自基质长出，幼时长度为300～400μm，老时长度为280～40μm，直径12～16μm，壁光滑，厚度1μm 左右，稍带黄色。顶囊球形，一般直径23～31μm，小梗双层，自顶囊全面着生，梗基一般（8.3～10.4）μm×（2.5～3.0）μm，小梗（6.2～8.4）μm×（2.1～2.5）μm。分生孢子球形或近于球形，直径为（3.5～4.0）μm，壁粗糙。

（二）糖化酶性质和糖化条件研究

黑曲霉变异株3.4309 产生的糖化酶，具有酶活力高、耐酸性、含转移葡糖苷酶少等特点。

该酶的最适pH 较宽，以pH4.5 为最好。稳定pH 范围为2.5～5.5。最适作用温度为60℃，但在70℃仍表现出较高的酶活力。在50℃以下是稳定的。酶液在501 保温2h，酶活力损失3%，60℃保温2h，剩余酶活力为55%，70℃保温2h，剩余酶活力为13.4%。用等电点聚焦电泳测得该酶的等电点为3.54。参照Kuzawashi 等人的方法测定了黑曲霉3912-12、Pr-3、3.4309 的转移细菌糖苷酶的活力，分别为16.06、16.22、10.49（mg 寡糖/mL 酶液），3.4309 菌比前两者约低1/3。(www.xing528.com)

在酶法制葡萄糖新工艺中，葡萄糖值（DE）的高低，直接影响到成品质量和收率。

1.最 适 糖 化pH 为4.2。 一 般 范 围 以pH3.5～4.5 为 宜。DE 值 在98%～99%。DE 值最高的范围也就是醇不溶物最少的范围。

2.糖化时酶用量一般为100U/g 干淀粉，DE 值可达99%左右。醇不溶物随着酶用量的增加而下降。

3.糖化最适温度为60℃，其次是55℃，在此温度范围内，醇不溶物含量减少，DE 值98.8%左右。

4.糖化时间试验表明：24h DE 值即可达98%，但醇不溶物含量较高，如生产注射用葡萄糖，则要求醇不溶物含量低，糖化时间可延至48～72h，而糖化DE 值在99%以上。

综上所述，最适糖化条件为pH4.2，60℃，加酶量为100U/g 干淀粉。