【摘要】：1．2．1RNA提取及cDNA的合成上述样品经液氮研磨后，总R N A的提取选用通用型超纯R N A提取试剂盒。1．2．2WER基因的克隆根据获得miR828a靶基因WER片段序列信息，利用Primer5软件设计3′RACE接头引物3RACEP1和3RACEP2，5′RACE接头引物5RACEP1和5RACEP2，3′端特异引物3′-inner和3′-outer，5′端特异引物5′-inner和5′-outer（表1）。用RACE方法对WER基因片段3′断和5′端进行克隆，拼接验证后获得全长cDNA，由生工生物工程（上海）股份有限公司进行基因测序。
1．2．1 RNA提取及cDNA的合成
上述样品经液氮研磨后，总R N A的提取选用通用型超纯R N A提取试剂盒（GR2011）。用于基因验证的cDNA采用第一链cDNA合成试剂盒（Thermo k1621）。
1．2．2 WER基因的克隆
根据获得miR828a靶基因WER片段序列信息，利用Primer5软件设计3′RACE接头引物3RACEP1和3RACEP2，5′RACE 接头引物5RACEP1和5RACEP2，3′端特异引物3′-inner和3′-outer，5′端特异引物5′-inner和5′-outer（表1）。用RACE方法对WER基因片段3′断和5′端进行克隆，拼接验证后获得全长cDNA，由生工生物工程（上海）股份有限公司进行基因测序。(www.xing528.com)
表1 引物序列
1．2．3 WER基因的生物信息学分析
生物信息学分析参照文献进行[12,13]，在NCBI（http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/）上完成核苷酸和蛋白序列比对分析；利用Protparam工具进行基因编码蛋白理化性质分析；SignalP预测氨基酸序列信号肽；ProtScale进行亲水性分析；采用ProtCompv.9.0进行亚细胞定位分析；并采用MEGA7.0软件进行WER及相关蛋白进化树的构建；再利用SWISS-MODEL预测蛋白质三维结构。
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