食用油脂中转基因分析技术

任务介绍

油料种植和转基因技术的结合极大地提高了世界植物油料的产量，随着转基因技术的不断进步，各国对转基因油料作物的种植、进口、加工的法规每年都在颁布。我国已为抗虫棉花、抗病番木瓜等7种转基因植物批准发放了农业转基因生物安全证书，分别是耐储存番茄、抗虫棉花、改变花色矮牵牛、抗病辣椒、抗病番木瓜、转植酸酶玉米和抗虫水稻。但实现大规模商业化生产的只有抗虫棉和抗病番木瓜，抗病辣椒和耐储存番茄在生产上没被消费者接受，故未实现商业化种植，而抗虫水稻和植酸酶玉米没完成后续的品种审定，未进行商业化种植。此外，还批准了转基因棉花、转基因大豆、转基因玉米、转基因油菜、转基因甜菜共5种作物的进口安全证书，用途均为加工原料。我国法律规定，进口用作加工原料的农业转基因生物不得改变用途，即不得在国内种植。

随着转基因作物的商业化的迅速发展，全球转基因油料作物商业化种植面积不断增加，转基因生物及其产品可能带来的生态环境和食用安全性问题引起了公众的高度关注，同时受到国际政治和经济因素的影响，许多国家纷纷出台了相应的管理法规。目前，世界上近70个国家和地区制定了转基因产品标识管理制度。中国是目前唯一采用定性标识的国家，而其他国家则施行定量标识，即阈值管理。为了方便转基因标识制度的实施，增加制度的可操作性，各国根据转基因产品的应用情况，制定标识目录。欧盟、澳大利亚、新西兰和巴西等国家和地区实施全面标识，日本、韩国、泰国、以色列、印度尼西亚、中国及中国台湾地区等实施目录标识。我国原农业部颁布的《农业转基因生物标识管理办法》，列入第一批转基因标识管理目录的有5类17种产品，其中食用植物油中的大豆油、玉米油和菜籽油要进行标识。农业转基因生物或用含有农业转基因生物成分的产品加工制成的产品，即使在最终销售产品中已不再含有或检测不出转基因成分的产品，仍然需要强制性标识。我国批准的转基因进口加工原料中，大豆、玉米和油菜主要用于制油、饲料等，其中食用植物油等加工食品经过复杂的加工过程后，蛋白质的含量极低，且DNA降解十分严重。部分实施转基因标识制度的国家认为在精炼油中没有DNA和蛋白质，因而不需要对油脂类产品进行标识。然而，精炼油中是否存在转基因成分仍然是人们关注的焦点，食用植物油中转基因成分成为继掺假、掺杂问题之后，值得人们关注的又一重大课题，许多研究者开展了对食用植物油中转基因成分检测及其方法的研究。

1. 食用油中DNA提取方法

食用植物油一般是经过原材料压榨、过滤、脱胶、脱酸、脱色、脱臭等加工环节精炼而成，加工环节经过240℃高温、高压、蒸汽、强碱等处理，蛋白质分子加热变性且被分离，所以无法采用ELISA 法检测，其转基因成分主要集中于DNA水平的检测。然而，DNA经过加工环节严重降解且破坏成小分子，利用PCR方法检测加工食品中的转基因成分，主要依赖于DNA 质量、纯度和总量，因此能否从食用植物油中分离出符合质量的DNA，是成功检测转基因成分的关键技术环节。

2. 食用油中转基因成分的检测方法(www.xing528.com)

食用油中DNA经提取后，能否成功检测植物油中转基因成分，检测方法和目的基因的选择是关键环节。在植物毛油中，植物内标基因能够有效扩增，因此在毛油中能够很好开展转基因成分检测。有些研究者认为，毛油经过第一步精炼之后，内标基因很难扩增，或者只能扩增到小片段DNA 的微弱条带。针对食用植物油转基因成分的检测方法主要采用了普通PCR、巢式PCR和实时荧光定量PCR。

巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对PCR 引物扩增完整的片段。第一对PCR 引物扩增片段和普通PCR 相似。第二对引物称为巢式引物（因为它们在第一次PCR扩增片段的内部），结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片断短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。为实现对微量、干扰成分复杂和被严重破坏的DNA样品的分析与检测，在普通PCR基础上发展起来的巢式 PCR 方法，其基本原理相同。利用两对嵌套引物，外引物对DNA模板进行扩增后，外引物扩增产物作为内引物进行第二轮扩增。

随着各国转基因标识制度的实施，转基因定量检测成为转基因标识制度实施的关键技术，实时荧光定量PCR检测方法具有检测靶标较短、特异性强、重复性好、可靠性高及操作时间短等优点，在转基因检测领域得到迅速发展和应用。针对食用植物油中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重等问题，实时荧光定量PCR方法检测转基因成分具有一定的优势。

由于外源DNA被严重破坏成短碎片状，本身可作为合适的模板的DNA序列很短，只有选用尽可能扩增出短片段的特异引物和探针，才能保证实验的可靠性和准确性，这一步骤对于PCR实验的成功极其重要。由此可见，缩短检测靶标开展食用植物油中转基因成分检测是今后研究的一个方向。