保健食品中非法添加降糖药物的快速检测方法

任务引入案例

“降糖神药”仁合胰宝违法添加西药 成本5元售价300元

南方都市报 自2016年以来，一款名为“仁合胰宝”的降糖保健品，在多个电商平台上火爆销售。患有糖尿病多年的李明磊在服用这款声称“无添加”“三位一体健胰法”的降糖“神药”后，出现了心慌等不良反应。经有关部门鉴定发现，其中非法添加了“双胍”类国家明令禁止的西药成分。

公安部统一指挥河北、湖南等11个省区市公安机关会同当地食药监管部门，成功破获了这起特大网络销售有毒有害保健品案。截至目前，共抓获犯罪嫌疑人76名，打掉黑窝点19个、黑工厂3个、涉嫌非法经营犯罪的化工厂1个，查获有毒有害保健食品15万余盒、西药原料1.3万余千克、制假流水线4条、化工生产设备27台，案值高达12亿元。

任务介绍

在降糖类保健食品中违法添加的不止盐酸苯乙双胍。原国家食品药品监督管理局早在2012年发布的保健食品中非法添加有毒有害物质名单，盐酸苯乙双胍位列其中。此外还有甲苯磺丁脲、格列苯脲、格列齐特、格列吡嗪、格列喹酮、格列美脲、马来酸罗格列酮、瑞格列奈、盐酸吡格列酮、盐酸二甲双胍。

2015年11月原国家食品药品监督管理总局通告，查获了31种假冒保健食品并涉嫌违法添加药物成分的通告。其中包括多种所谓降糖保健食品：标称“北京仁济生物科技有限公司”生产的糖舒安尼达忠瓦胶囊，检出苯乙双胍、格列苯脲、罗格列酮；标称“福州创新正分子生物制品有限公司”生产的丹参苦瓜胶囊，检出苯乙双胍、格列苯脲、吡格列酮；标称“河南省泷鑫医药保健品有限公司”生产的金鑫玉铬桑胶囊，检出盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、格列本脲、马来酸罗格列酮；标称“贵州苗家医药保健品有限责任公司”生产的蜂胶活胰素（苗特R葛灵胶囊），检出苯乙双胍、格列苯脲、吡格列酮。

目前调节血糖功能的保健食品中违禁添加药物按作用机制可分为四大类：胰岛素分泌促进剂、胰岛素增敏剂、减少碳化合物吸收的药物和醛糖还原酶抑制剂。胰岛素分泌促进剂包括磺酰脲类和非磺酰脲类，其中磺酰脲类有：格列本脲、格列美脲、格列吡嗪、格列齐特、甲苯磺丁脲，氯磺丙脲。胰岛素增敏剂有：

①噻唑烷二酮类：盐酸吡格列酮、格列喹酮、罗格列酮、环格列酮、恩格列酮。

②双胍类：盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、苯乙福明、甲福明。

③β-肾上腺素受体激动剂：BRL-35135A、BTA-243。

④脂肪酸代谢干扰剂：依托莫司、SDZ-FOX-988。

减少碳化合物吸收的药物主要有：

①α-葡萄糖甙酶抑制药：阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇。

②淀粉不溶素。醛糖还原酶抑制剂主要有托瑞司他和依帕司他。

双胍类是一种典型的降糖药物，该类药物并不直接刺激胰岛素分泌，而主要是通过抑制肝脏的糖异生，促进外周胰岛素靶组织对葡萄糖的摄取和利用来改善肌体的胰岛素敏感性，能明显改善患者的糖耐量和高胰岛素血症，降低血浆游离脂肪酸（FFA）和血浆甘油三酯水平。主要不良反应是消化道症状，有心、肾功能障碍的老年患者有发生乳酸中毒的危险。一旦超过其使用量会产生中毒现象，同时还伴有很强的副作用。磺酰脲类药物中，格列吡嗪（美吡达、瑞罗宁、迪沙、依吡达、优哒灵）和格列齐特（达美康）均为第二代磺酰脲类药，其中格列吡嗪起效快，药效在人体可持续6～8h，对降低餐后高血糖特别有效；格列齐特药效比第一代甲苯磺丁脲强10倍以上，是成年型Ⅱ型糖尿病、Ⅱ型糖尿病伴肥胖症或伴血管病变者的处方药。如在不知情时长期服用磺酰脲类药物后，很可能引起低血糖或者体重增加。

国家明令禁止在降糖类保健食品、中成药及具有该功能的健康食品中添加降糖类药物，而不法商家为了达到疗效，赚取暴利，非法在健康类产品中添加降糖类物质，对消费者的身体健康造成很大的伤害。因此，对保健食品中非法添加降糖药物的快速分析具有现实意义。

任务实操

实操一 双胍类药物的快速检测

方法一 试剂盒法

1. 适用范围

适用于快速筛查保健食品中非法添加的双胍类（盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、盐酸丁二胍）。

2. 检测原理

双胍类化学成分与亚硝酰铁氰化钠-铁氰化钾-氢氧化钠混合溶液反应生成氢氧化铁，显示红褐色。

3. 检测试剂和器具

试剂：试剂A，试剂B，试剂C。

器具：显色板，反应管，0.5mL 一次性吸管，2.5mL 注射器，过滤器，毛细点样管，称量纸。

4. 检测步骤

（1）显色剂的准备 打开试剂B 瓶，将试剂C 全部倒入试剂B 瓶中，旋紧瓶盖，振摇使粉末溶解；静置15min以上，待溶液褪色为淡黄色或黄色时可使用。

（2）不同剂型取样

①颗粒、片剂、丸剂：压碎成粉末取1g于A瓶中；

②硬胶囊：旋开胶囊壳，称取1g内容物于试剂A瓶中；

③软胶囊：用剪刀剪开胶囊壳，挤出后直接称取1g内容物于试剂A瓶中。

（3）样品前处理 拧紧试剂A 瓶瓶盖，充分振荡混匀1min，静置2～3min 使上层溶液澄清；拔下注射器活塞及针头，换上过滤器，将样本上清液轻轻倒入针筒内，装入活塞挤压，收集滤液至1.5mL离心管中。

（4）样品测定 用毛细点样管吸取离心管中的液体（2～3s），将毛细吸管对准显色板的中心位置，垂直于显色板接触（2～3s），待显色板上的点样液挥发至干，用0.5mL一次性吸管吸取试剂B，对准点样位置滴加1滴，立即观察显色板的显色情况。

5. 结果判定

若点样位置显示紫色、紫红色、红色、红褐色，则可判定检测样品中含有双胍类，即为阳性（+）；若显示淡黄色，判为阴性（-）。

6. 注意事项

（1）以点样中心位置判读为准。

（2）当气温较低时，可用手握住试剂瓶或浸泡在20～40℃的温水中加热，加快显色剂的制备。

（3）试剂有腐蚀性或毒性，避免与皮肤及黏膜接触，如误入眼中，请立即用大量清水冲洗。

（4）试剂用完后，应旋紧瓶盖，密封至塑料袋中丢弃。

方法二 仪器法

1. 适用范围

适用于降糖类中成药、调节血糖或者辅助降血糖类硬胶囊剂、片剂、颗粒剂等固体剂型和水剂、软胶囊剂等液体剂型保健食品以及其他标示上述功能的健康产品中双胍类药物的快速检测。

2. 检测原理

双胍类既能溶于有机溶剂，又能溶于碱性溶液中，经有机溶剂提取，碱溶液萃取后，在碱性条件下与显色剂反应生成氢氧化铁（红褐色），浓度越高，显色越深。经仪器可进行半定量测定。

3. 检测试剂、器具和仪器

试剂：试剂A、试剂B、试剂C、试剂D。

器具：5mL离心管，2mL离心管，称量纸，胶头滴管，过滤器（试剂盒配备，特殊样品使用）。

仪器：DY-3500食品综合分析仪（广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司）。

4. 检测步骤

（1）样品前处理

①提取液配制：取5mL 离心管，加入1.6mL 试剂C，0.4mL 试剂D，盖上管盖轻轻混匀，此为提取液。（此处使用移液管为最佳）

②固体剂型：取一次服用量充分碾碎混匀，准确称取0.1g，加入上述提取液，振荡1min，静置2min。取一套注射器拔出活塞，注射器下端置于5mL 离心管口。向注射器中倒入样品提取液上清，加上活塞挤压收集滤液至5mL离心管中。完毕，向此离心管中加入1.8mL 纯净水，盖上管盖，上下颠倒混合数次，静置5min 分层。上层液体待测。

③水剂：直接取100μL样品液于提取液中混匀，静置1min，加入1.8mL 纯净水，盖上管盖，上下颠倒混匀数次，静置5min分层，上层液体待测。

④软胶囊剂：若内含物为液体，则同水剂一样处理；若内含物为半固体型，则同固体剂型一样处理。

⑤空白对照：直接向提取液中加入1.8mL 纯净水，上下颠倒混匀数次，静置分层。上层液体待测。(www.xing528.com)

（2）样品检测

①显色剂配制：取一管试剂A 将其中的粉末全部倒入配制瓶，吸取3mL 试剂B于配制瓶中。混匀放置10min 以上，待溶液褪去红色（显黄色或者黄绿色）时可使用。

②对照测试：取一个2mL离心管，用胶头滴管吸取空白对照上清液至2mL 刻度线。加入100μL显色剂，摇匀，反应5min。上机进行对照检测。

③样品测试：取一个2mL离心管，用胶头滴管吸取样品待测上清液至2mL 刻度线。加入100μL显色剂，摇匀，反应5min。上机进行样品检测。

5. 结果计算

样品中双胍类的含量：

固体剂型：仪器所示的浓度值×36.7mg/kg。

液体剂型：仪器所示的浓度值×22mg/kg。

6. 注意事项

（1）部分样品显色过程中会出现明显褪色现象，此类样品则可在加入显色剂后2min左右即倒入比色皿进行显色，如蜂胶糖脂舒软胶囊。

（2）部分保健食品提取液过滤后若仍然浑浊，则考虑接上过滤器后过滤。

（3）显色剂需现配现用，如出现沉淀或者变色，请勿使用。

（4）在显色剂制备过程中，可以进行样品的前处理。

（5）显色剂配制瓶可洗净后重复利用，如显色剂配制时温度较低，可选择在20～40℃的温度下加速其变色反应。

（6）试剂用完后，应旋紧瓶盖，密封至塑料袋中丢弃。如遇到试剂沾染皮肤或误入眼中，应立即用大量清水冲洗。

实操二 磺酰脲类药物的快速检测

1. 适用范围

适用于药品、保健食品中非法添加磺酰脲类（格列齐特、格列吡嗪）的快速检测。

2. 检测原理

样品中的磺酰脲类（格列齐特、格列吡嗪）在层析纸上固定相和流动相间产生的吸附作用不同，通过与标准溶液在层析纸上比移值的差异来直接判断是否存在磺酰脲类。

3. 检测步骤

（1）不同剂型取样

颗粒、片剂、丸剂、硬胶囊：压碎成粉末或直接称取0.5g于试剂A瓶中；

软胶囊：用剪刀剪开胶囊壳，挤出后直接称取0.5g内容物于试剂A瓶中；

液体制剂：直接取0.5mL于试剂A瓶中。

（2）样品前处理

拧紧试剂A瓶瓶盖，振荡1min，使试剂和样品充分混匀，静置2～3min 使上层液澄清。用注射器取少量上清液，经过滤器过滤，滤液待测（仅需几微升即可）。

（3）样品检测

用铅笔在硅胶板上距离底端约0.5cm轻轻画一条线，然后在线上点两个小点，如图2-9所示。用毛细管吸取反应管中的液体（2～3s），将毛细管对准硅胶板所画小点，垂直与反应板接触（2～3s）；再用毛细管吸取参照品中的液体（2～3s），将毛细管对准硅胶板所画小点，垂直与反应板接触（2～3s），待点样液挥干；将试剂B倒在小烧杯中，将硅胶板竖直插入小烧杯中，爬板时间为90s。最后使用紫外灯在阴暗环境下近距离照射硅胶板。

4. 结果判定

使用紫外灯在阴暗环境下近距离照射的硅胶板如图2-10所示，若位置A或B有点存在即说明有磺酰脲类物质（除A 和B 位置之外，其他位置的点与本次测试无关）。样品中磺酰脲类检出限1g/kg。

图2-9 硅胶板示意图

图2-10 磺酰脲类检测结果判定图

5. 注意事项

（1）保证爬板均匀，若点爬歪需重新点板。

（2）若样品在A或B点处不出现，但在A或B点上下2mm之内出现，需重新点板确定。

实操三 噻唑烷酮类药物的快速检测

1. 适用范围

适用于保健食品中非法添加噻唑烷酮类（盐酸吡格列酮、罗格列酮）的快速检测。

2. 检测原理

用二氯甲烷将样品中的罗格列酮、吡格列酮溶出，经盐酸除去脂溶性杂质，与磷钼酸反应生成沉淀。

3. 检测试剂和器具

试剂：试剂A，试剂B，试剂C。

器具：反应管，2.5mL注射器，过滤器，0.5mL一次性吸管，称量纸。

4. 检测步骤

（1）不同剂型取样 硬胶囊剂约取0.5g内容物；软胶囊挤出内容物称取0.5g；颗粒、片剂、丸剂等压碎成粉状称取0.5g。

（2）样品前处理 取一支试剂A，将所取样品加入管中，盖紧盖子大力振荡混匀1～2min，静置2～3min，至上层溶液澄清；拔下注射器活塞及针头，换上过滤器，将A瓶上清液倒入针筒内，装入活塞挤压，收集全部滤液于试剂B 瓶中，上下颠倒混匀约30s，静置。

（3）样品检测 用0.5mL一次性吸管吸取约1mL上层清液于反应管中，滴加2～3滴试剂C，静置观察结果。

5. 结果判定

3min内，若上层出现黄白色浑浊，则可判定样品中含有噻唑烷酮类物质，为阳性（+）；否则判为阴性（-）。检测样品中噻唑烷酮类药物检出限为0.5g/kg。

6. 注意事项

（1）本方法仅为定性筛查用；对于测定结果为阳性的样品，应送样至实验室或有资质检测机构进行精确定量。

（2）试剂有腐蚀性或毒性，避免与皮肤接触，如误入眼中，请立即用大量清水冲洗。

任务拓展

降糖类保健食品主要功效成分——多糖类化合物。

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