一、目的要求
（1）学习放线菌的制片方法，观察放线菌的细胞形态和菌落特征。
（2）学习霉菌的制片方法，观察常见霉菌的细胞形态构造和菌落特征。
二、基本原理
放线菌是由菌丝组成的分枝丝状体，以链霉菌属的菌丝体最为发达。菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。放线菌发育到一定阶段，孢子丝开始形成孢子。孢子丝有直形、波曲形、螺旋形、轮生、单搓分枝等；孢子有球形、椭圆形、柱形或瓜子形、刺形等，常成串排列或单个存在。这些特征是鉴定菌种的重要依据之一。放线菌菌落特征：圆形、较小、干燥、质地紧密，表面粉状或茸毛状，有的呈同心环或辐射状。基内菌丝与培养基结合紧密，难以挑取。菌丝体与孢子常具有不同色素，所以菌落正面与背面可显示相应颜色。
霉菌是丝状真菌的俗称，个体大且构造复杂，菌丝一般无色透明，宽度在3～10μm，有隔或无隔，在低倍镜或高倍镜下即可看清。菌体分为基内菌丝与气生菌丝，气生菌丝上产生孢子。孢子形状、颜色以及着生部位和排列方式等是霉菌分类的重要依据。霉菌菌落特征：一般较大，多数有固定形状，菌丝体结构疏松，多呈绒毛状、蜘蛛网状或棉絮状；表面粉粒状或粗粒状；孢子颜色多样。
三、实验材料
（1）菌种 斜面培养的灰色链霉菌、细黄链霉菌，根霉、青霉、曲霉、毛霉。
（2）器材、培养基及试剂高氏1号培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基；石炭酸复红染色液、载玻片、盖玻片、接种环、吸管、刮铲、镊子、镜检用物等。
四、实验步骤
（一）放线菌插片培养
（1）插片制作 用接种环挑取放线菌斜面培养试管内的少许菌体，制成孢子悬液。用无菌吸管吸取孢子悬液一滴，放入高氏1号平板培养基上并用无菌刮铲涂布均匀，然后将消毒后的盖玻片以倾斜45 °角插入培养基内，插片的深度以插入培养基的1/2为宜。(www.xing528.com)
（2）培养 插片平板放入28℃恒温箱中培养4～5d，观察菌落特征。
（3）制片 用镊子取插片一张，用吸水纸擦去生长较差一面的菌丝体，然后用镊子夹住盖玻片，菌面朝上，通过火焰2～3次进行加热固定，冷却。
（4）染色 在盖玻片上滴加石炭酸复红染色液1min，水洗干燥。
（5）镜检 取干净载玻片一张，将盖玻片染色面向下，放在载玻片中央，在低倍镜、高倍镜、油镜下观察基内菌丝、气生菌丝和孢子丝的形态特征。
（二）霉菌载片培养法
（1）制片在装有U形玻璃棒的无菌培养皿中，倒入3～4mL无菌水以保持湿度，按无菌操作法将灭过菌的载玻片放在U形玻璃棒上，用无菌吸管吸取融化并冷却至50℃左右的马铃薯蔗糖琼脂培养基于载玻片上数滴，待凝固后，用接种环接入霉菌孢子于培养基上，再用无菌镊子取灭过菌的盖玻片放在培养基上，并轻压几下，培养皿置于恒温箱内28℃培养24h，观察菌落特征。
（2）镜检 在低倍镜下观察霉菌个体形态，在高倍镜下观察霉菌菌丝、孢子囊、假根、帚状枝等结构。
五、实验报告
绘出镜检的放线菌、霉菌的形态构造图，描述放线菌、青霉、根霉、曲霉、毛霉的菌落特征。
六、思考题
放线菌、霉菌制片法与细菌制片法有何不同？
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