常用玻璃器皿的清洁与包装技巧

一、目的要求

1.理解微生物实验中常用玻璃器皿的清洗和包扎的重要性。

2.掌握微生物实验中常用玻璃器皿的清洗和包扎技术。

3.掌握常用洗涤剂的配制方法。

二、基本原理

微生物实验中常用的玻璃器皿使用前后的清洗、干燥、包装和灭菌，是微生物实验得到正确结果的先决条件。微生物实验中常用的玻璃器皿很多，如培养皿、试管、三角瓶、吸管、载玻片和烧杯等。新购置的玻璃器皿因含游离碱，使用前必须洗涤。使用过的玻璃器皿根据其盛装过的物质不同采取相应的处理方法。而且，常根据实验目的不同，采取的洗涤方法不同，清洗程度的要求不同。有的玻璃器皿清洗后要进行干燥，有的需通过灭菌达到无菌状态，甚至有的需包扎后再进行灭菌。

水只能洗去可溶于水的沾污物，对于不溶于水的沾污物必须用其他方法处理后再用水清洗。肥皂、洗衣粉、去污粉、铬酸洗涤液是常用的洗涤剂。

三、材料与仪器

（1）试剂 浓硫酸、重铬酸钠或重铬酸钾（工业用）、盐酸、95%乙醇、苏打、氢氧化钠、煤酚皂液、新洁尔灭、石炭酸、来苏儿、二甲苯、洗衣粉、去污粉、肥皂等。

（2）仪器和用具 高压蒸汽灭菌器、干热灭菌器、各种常用的玻璃器皿、洗涤工具、试管架、报纸或牛皮纸、普通棉花等。

四、方法与步骤

（一）新购置的玻璃器皿的洗涤

新玻璃器皿常附有游离碱质，不能直接使用。处理方法：先用1%～2%的盐酸溶液或洗涤液浸泡24h，以中和碱质，然后用清水冲洗至中性；或先放在热水中浸泡，用瓶刷或试管刷蘸洗衣粉或去污粉等刷洗，然后用热水洗刷，再用清水冲洗。

新载玻片也可在1%洗衣粉水中煮沸15～20min，然后再用清水冲洗至中性，注意煮沸液一定要浸没玻片，否则会使玻片钙化变质。新盖玻片可放在1%洗衣粉水中煮沸1min后，待沸点泡平下后，再煮沸1min，如此2～3次，冷却后用清水冲洗干净，注意煮沸时间过长会使盖玻片钙化变白而且变脆易碎。新的载玻片和盖玻片也可先浸入肥皂水（或2%盐酸）内1h，再用水洗净，用软布擦干后浸入滴有少量盐酸的95%乙醇中，保存备用。

（二）使用过的玻璃器皿的洗涤

1.试管、培养皿、烧杯和三角瓶的洗涤

使用过的试管、培养皿、烧杯和三角瓶，可用瓶刷或试管刷蘸洗衣粉或去污粉等刷洗，然后用清水冲洗干净即可。对沾有油污的玻璃器皿，或经清水冲洗后仍有油迹未洗干净，可将玻璃器皿置于1%～5%苏打溶液或5%肥皂水中煮沸30min，或用10%氢氧化钠（粗制品）浸泡30min，再用洗涤剂及热水刷洗，最后用清水冲洗干净。

2.吸管和滴管的洗涤

吸管先去掉棉塞，滴管先拔去橡皮头。将吸管和滴管放在2%的煤酚皂溶液或0.5%新洁尔灭中浸泡数小时，然后用清水冲洗干净。曾吸过琼脂的吸管，使用后立即用热水将琼脂洗净后再进行处理。浸泡吸管时，要在玻璃缸底部垫以棉花、纱布或其他软质材料，以防放入吸管时管尖破裂。

3.载玻片和盖玻片的洗涤

载玻片上如有香柏油，先用二甲苯溶解油垢。将载玻片和盖玻片置于5%的肥皂水中煮沸10min，取出用清水冲洗干净，然后放在稀洗涤液中浸泡1～2h，取出用清水冲洗至无色为止；或在1%洗衣粉水中煮沸30min，然后再用清水冲洗至中性，最后用蒸馏水淋洗。待玻片干燥后，置于95%乙醇中保存，用时取出载玻片在火焰上烧去乙醇即可。

4.盛有固体培养基或油脂（如液体石蜡、凡士林）等的玻璃器皿的洗涤

先用小刀或铁丝将器皿中的固体培养基取出，或将此器皿放在水中蒸煮，使固体培养基融化后趁热倒出，然后用温水洗涤，必要时可沾肥皂水刷洗，最后用清水冲洗。注意固体培养基切勿直接倒入下水道，以免堵塞下水道。

5.污染病原菌的玻璃器皿

被病原菌污染过的玻璃器皿，在洗涤前必须进行严格的灭菌。盛装血液或血清的玻璃器皿，先将血液或血清倒出后再进行灭菌。

（1）一般玻璃器皿（如试管、烧杯、培养皿等）均可在高压蒸汽灭菌器内进行灭菌，温度121℃，压力0.103MPa，时间20～30min。

（2）载玻片、盖玻片和吸管等器皿可在5%石炭酸或2%来苏儿中浸泡48h。

玻璃器皿最后用清水冲洗后，必要时还需用蒸馏水淋洗。洗涤后的玻璃器皿，要求内壁的水均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净；如果内壁还挂有水珠，则需用洗涤液浸泡数小时，然后再用清水冲洗干净。

洗涤后的玻璃器皿，放在70～80℃烘箱内烘干或晾干。试管倒置在试管架上，三角瓶倒置在洗涤架上，培养皿的皿盖和皿底分开，按顺序压着皿边倒扣排列在桌上或铁丝筐内。

（三）玻璃器皿的包扎(www.xing528.com)

灭菌前玻璃器皿必须妥善包扎，以免灭菌后又被环境中的杂菌污染。

1.培养皿的包扎

洗净的培养皿烘干后，可直接放入灭菌专用的铁盒（或铝盒）内，否则需用报纸或牛皮纸将培养皿单套或数套包成一包，再进行灭菌。一般以5～10套培养皿为一包。

2.吸管的包扎

先在洗净并烘干的吸管粗头（距管口1～2mm处）塞入少许棉花（长1～1.5cm），以免使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。棉花要塞得松紧适宜，过紧，吹吸液体太费力；过松，吹气时棉花会下滑。每支吸管用一条宽4～5cm的纸条，将吸管尖端斜放在纸条的近左端，与纸条约呈30°～45°角，并将左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管螺旋卷入纸条内，右端多余的纸条折叠打一小结，以防纸条散开（图12-1）。如此包好的吸管每10支用一张大报纸包好再进行灭菌。如果有灭菌专用的铁筒，也可将分别包好的吸管一起放入筒内再进行灭菌。使用时，每支吸管从中间拧断纸条，抽出吸管。

3.三角瓶、试管的包扎

三角瓶和试管包扎前要用棉塞将管口或瓶口塞好，棉塞的2/3塞入口内，1/3露在口外（图12-2）。加棉塞后，三角瓶单个用牛皮纸或两层报纸及线绳将瓶口包扎好。试管数支先用线绳捆扎，再用牛皮纸或两层报纸及线绳将管口包扎好。试管塞好棉塞后也可一起装在铁丝篓中，用大张报纸将一篓试管口做一次包扎。

图12-1 吸管的包扎

（张青，葛菁萍.微生物学.2004）

图12-2 塞棉塞的方法

（张青，葛菁萍.微生物学.2004）

棉塞外包纸的作用：①保存期避免灰尘进入棉塞，造成棉塞的污染。②避免湿热灭菌时蒸汽打湿棉塞。

棉塞的作用：①过滤作用，防止空气中的微生物进入容器。②通气作用，保证通气良好。③减缓培养基水分蒸发。

棉塞的质量要求：正确棉塞的形状、大小、松紧应与试管口或三角瓶口完全适合。棉塞形状应为锤头状。棉塞的长度以不小于管口直径的2倍为宜。棉塞应紧贴玻璃壁，没有皱褶和缝隙，松紧适宜。棉塞过紧会妨碍空气流通，而且操作不便；棉塞过松易掉落，从而引起污染。棉塞的松紧以手提棉塞时试管或三角瓶不脱落，棉塞又易转动，拔出棉塞时有轻微响声为宜。

制作棉塞的主要材料：要求选用纤维较长的普通棉花，一般不用脱脂棉制作棉塞。因为普通棉花纤维长，通气性好；脱脂棉纤维间的孔隙大，过滤除菌的效果不好，容易吸水变湿，既有碍空气进入，又易招致杂菌污染，而且价格贵。

棉塞的种类：①一次性棉塞。每个棉塞只能用一次。②永久性棉塞。每个棉塞外包裹纱布，可反复使用多次。

棉塞的制作方法一：选择大小、厚薄适中的棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔中，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞。方法二（折叠卷塞法制作棉塞）：根据需要量取正方形的棉花数层，互相重叠，将一角沿对角线的1/3处对折，再从相邻一角开始卷曲，最终卷成锤头状（图12-3）。

图12-3 棉塞的制作方法

（张青，葛菁萍.微生物学.2004）

另外，也可采用塑料、铝质或不锈钢的试管帽代替棉塞，直接盖在试管口上，但操作过程中手感不如棉塞舒服，其通气效果也稍差。有时，为了进行液体振荡培养加大通气量，可用8层纱布或在两层纱布中间均匀铺一层棉花代替棉塞包在三角瓶口上。目前更多的是采用既通气又能高压灭菌的塑料封口膜直接包在三角瓶口上，这种封口既保证通气良好，过滤除菌，操作又简便。

五、结果报告

1.记录玻璃器皿洗涤过程。

2.检查玻璃器皿洗涤效果、棉塞制作的质量、玻璃器皿包扎的质量。

六、复习思考题

1.微生物实验室常用的洗涤剂有哪些？

2.如何清洗载玻片和盖玻片？

3.灭菌前如何包扎培养皿和吸管？

4.为什么不能使用脱脂棉制作棉塞？