植物组织石蜡切片实验探究

（一）用具与药品

旋转切片机、恒温展片台、石蜡、烘箱、染缸、尖头镊子、单面刀片、双面刀片、载玻片、盖玻片、小烧杯、解剖针、解剖剪、培养皿、注射器、毛笔、称量瓶、吸水纸、各级乙醇、0.01 g/mL番红水溶液、0.005 g/mL伊红乙醇溶液、铁明矾溶液、0.01 g/mL固绿水溶液、FAA固定液、卡诺固定液、苏木精染色液、苦味酸饱和水溶液、二甲苯、中性树胶等。

（二）材料

洋葱根尖或水仙根尖、菊茎、大叶黄杨叶等。

（三）操作步骤

1．根尖制片

（1）取材　用刀片割下一段根尖，切忌挤压，然后放在一张湿的滤纸上，用刀片截取材料，长度5～8 mm，切时压力不能太大以免压坏组织。

（2）固定　材料切好后，应立即投入盛有卡诺固定液的称量瓶中固定1～4 h。通常材料多含有空气，以致固定时漂浮起来，而且阻碍固定液的透入，所以在固定时要经过抽气，最简单的方法是使用注射器抽去材料中的空气。

（3）脱水　固定完毕后可直接进入85%乙醇开始脱水。如用水洗的则须从低浓度开始，可依次浸入15%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中进行脱水，各1 h。如操作不完，可在70%乙醇中过夜保存。

（4）透明　脱水后浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中各2 h。

（5）浸蜡　将已透明的材料放入37 ℃的50%石蜡［即等量（体积）二甲苯和石蜡的混合物］中浸1～2 d，后浸入60 ℃纯石蜡Ⅰ、60 ℃纯石蜡Ⅱ、60 ℃纯石蜡Ⅲ中各2 h。

（6）包埋　同“实验一 动物组织石蜡切片”中的包埋过程。

（7）切片　厚度一般为6～8 μm。

（8）展片　在干净的载玻片上均匀涂一薄层甘油明胶，然后在涂层上滴数滴蒸馏水，用刀片事先将蜡带分割成小段，并正面朝上漂浮在水滴上，然后把玻片放在展片台上，使温度保持在50 ℃左右。因蜡带受热而膨胀对材料产生一定的拉力而展开，及时调整蜡带的位置使其美观。待切片完全展平后，吸去多余水分。

（9）干燥　置于37 ℃温箱中干燥24 h，备用。

（10）脱蜡与复水　将烘干的切片放入染色缸，依次浸入100%二甲苯Ⅰ和100%二甲苯Ⅱ中各1 h以脱蜡，然后依次浸入50%二甲苯、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、85%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、30%乙醇中各5 min，最后流水冲洗5 min即可。

（11）媒染　在0.04 g/mL铁明矾水溶液中媒染30 min。

（12）冲洗　先用流水冲洗15 min，再用蒸馏水漂洗。

（13）染色　0.005 g/mL苏木精染色15～30 min。

（14）漂洗　流水洗去多余染料，再用蒸馏水漂洗。

（15）分色　在苦味酸饱和水溶液中分色，30 min后可取出，镜检分色情况，使细胞内的染色体、核仁等分辨清楚（大约30 min～2 h）。

（16）冲洗　用水冲洗30 min，以洗去苦味酸。

（17）氨化　用1%氨水处理1～5 min，使细胞核充分返蓝。

（18）脱水　依次浸入30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇中脱水，各10 min。

（19）复染　浸入0.5%伊红乙醇液复染30 s，此步可略。

（20）继续脱水　依次浸入95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中脱水，各10 min。(www.xing528.com)

（21）透明　依次浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ，各30 min。

（22）封藏　用中性树胶封片。

染色结果：洋葱根尖细胞细胞壁蓝色，如复染则细胞质红色，染色体深蓝色（图3-3）。

向日葵幼根横切的番红固绿染色效果见图3-4。

2．幼茎制片

凡草质茎或木质化幼茎，均可用此法进行制片，但关键是要充分浸蜡。

（1）取材　取杆枝较细或木质化程度不高的幼茎，切取3～4 mm的小段。

图3-3　洋葱根尖纵切

图3-4　向日葵幼根横切

（2）固定　用FAA液固定24 h，然后70%乙醇冲洗3次，每次2 h，并保存在此液中过夜。

（3）脱水与透明　依次浸入70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中进行脱水与透明，每个浓度停留约2 h。

（4）浸蜡与包埋　（参照根尖制片）浸蜡时间约2 d，一定要浸蜡彻底。

（5）切片、展片、干燥、脱蜡及复水按常规进行（参照根尖制片）。

（6）染色　用番红与固绿对染，也可用铁矾苏木精与番红对染。用固绿染色5 min（或0.02 g/mL铁明矾媒染5 min，流水冲洗5 min，苏木精染色至胞间层呈黑色，纤维素壁呈黑灰色）后水洗，再用番红水溶液染5 min。

（7）脱水　依次浸入70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中进行脱水，各10 min。

（8）透明　依次浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中，各30 min。

（9）封藏　用中性树胶封片。

染色结果：木质化壁红色，纤维素壁绿色（图3-5，图3-6）。

（四）思考题

为什么制作植物组织石蜡切片比制作动物组织石蜡切片时间要长很多？如果不能连续做，中间需停留，为什么要停留在70%乙醇中？

图3-5　女贞幼茎横切

图3-6　棉花茎横切

（五）实验报告

1．你的实验结果（贴图）

2．实验总结（心得与体会）