徒手切片是指用保安刀片将新鲜或固定的材料切成薄片。其优点是简单方便,可观察新鲜切片。
(一)用具与药品
尖头镊子、单面刀片、双面刀片、载玻片、盖玻片、小烧杯和解剖针、解剖剪、培养皿、酒精灯、吸水纸、各浓度乙醇、0.01 g/mL番红溶液、0.005 g/mL固绿溶液、二甲苯、中性树胶。
(二)材料
(三)操作步骤
(1)取材 选择发育正常、健康、有代表性的嫩茎或叶柄,用刀片从植株上割下,立即进行切片或保存在水中以防萎蔫。
(2)切片 取长约1~2 cm的材料,用左手拇指和食指夹住材料,上端略长2~3 mm,然后将臂紧靠腰部,使之不动。右手平稳地握刀,刀口向内,右臂悬空,位置固定后即可切片。不要拉锯式切割。刀片由左前方向右后方移动时中途不要停顿。切片时刀片和材料要保持湿润。
(3)固定 选较薄的切片移入70%乙醇或95%乙醇中固定。根据切片的厚薄不同,固定时间从几分钟到几小时不等。
(4)染色 浸入番红溶液,染色12~24 h,然后浸入50%乙醇,冲洗至纤维素壁红色变淡而木质部细胞深粉红色。
(5)脱水 分别浸入70%乙醇、80%乙醇中,各1 min。(www.xing528.com)
(6)复染 入固绿溶液染色1 min。
(7)继续脱水 入95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ,各1 min;再浸入100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中,各5 min。
(8)透明 分别浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中,各5 min。
(9)封藏 用中性树胶封片。
染色结果:木质化细胞壁呈红色,韧皮部和其他纤维素细胞呈绿色。
(四)思考题
为什么徒手切片时不能拉锯式来回切割,且移动时中途不要停顿?
(五)实验报告
1.你的实验结果(贴图)
2.实验总结(心得与体会)
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