（一）用具与药品
骨锯、刷子、细磨石、油磨石、鐴刀皮、载玻片、盖玻片、乙醚、各浓度乙醇、2%酸性品红乙醇液、润滑油、0.007 5 g/mL硝酸银水溶液、甲醛、对苯二酚、1%双氧水、二甲苯、中性树胶。
（二）材料
齿、鳍条、贝壳、骨板等坚硬部分。
（三）操作步骤（以骨为例）
（1）清洗与脱脂 将骨放在温水中浸泡数日，使其周围的结缔组织和肌肉腐烂，刷洗干净，晒干后放入95%乙醇中浸泡数日脱脂。晾干。
（2）锯片 锯成l～2 mm厚的薄片。横切和纵切的面必须很正。
（3）粗磨 在粗磨石上加水磨至约0.2 mm厚的薄片，厚薄必须均匀。
（4）细磨 用细磨石磨成20～30 μm的薄片。待骨片干燥后，镜检，至能看清骨小管为止。
（5）磨平 在鐴刀皮上将骨片磨平滑（此步要干磨）。
（6）脱脂 蒸馏水洗数次，再放入80%和95%乙醇中脱脂（各12～24 h）。如脂肪很多，可用无水乙醇或乙醚和无水乙醇的等量混合液脱脂10 h，然后晾干。
（7）封藏 在载玻片上加7～8滴浓树胶，再放在酒精灯火焰外面约l cm处烤至不易流动为止，趁热放上干燥骨片，加上盖玻片稍烤即成。注意不要使树胶透入骨小管内。
为使磨片更加清晰美观，可进行染色：
（1）品红乙醇浸染法。
① 经过细磨脱脂后的薄骨片，从95%的热乙醇中取出后立即投入2%酸性品红乙醇液中。浸液体积约为组织的10～20倍。
② 在洒精灯上慢慢加热至沸，约5～10 min，至浸液蒸发为组织的2～4倍。
③ 将组织和剩余浸液一起置于室温下3～5 d至浸液蒸发完，不可过干。
④ 浸染过的薄骨片浸泡在润滑油内。
⑤ 将薄骨片用油放在细油磨石上研磨（双面研磨），磨掉两面的浮色，用显微镜检查，直至骨的结构清晰为止。(www.xing528.com)
⑥ 磨好的骨片剪成小条放入二甲苯中透明1 d。
⑦ 从二甲苯中取出，吸干骨片周围的二甲苯后，用中性树胶封藏。
染色结果：背景几乎无色，哈氏管深红色或黑色，骨陷窝和骨小管深红色，部分骨细胞体呈淡红色（图2-19A）。
（2）银沉积法。
① 骨片磨薄（但不可过薄）后浸于乙醚乙醇中脱脂，晒干，蒸馏水略洗。
② 置于0.007 5 g/mL硝酸银水溶液中1～3 d（置暗处，瓶底置脱脂棉）。
③ 蒸馏水速洗1次后入还原液（甲醛2～5 mL，对苯二酚1 g，蒸馏水100 mL）约18～24 h。
④ 充分水洗。
⑤ 用细磨石两面磨薄，至显微镜下能看清楚骨小管为止。如颜色太黑，可用1%双氧水分化。
⑥ 水洗、梯度乙醇脱水、二甲苯透明及中性树胶封藏。
染色结果：骨小管及腔隙呈黑色，其他结构深褐色（图2-19B）。
图2-19 硬骨横磨片（A.品红乙醇染色；B.银染）
（四）思考题
在磨片过程中，如何才能把骨片磨得薄而均匀？
（五）实验报告
1．你的实验结果（贴图）
2．实验总结（心得与体会）
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