植物根尖压片法实验优化

（一）用具与药品

小镊子、双面刀片、载玻片、盖玻片、小烧杯、解剖针、培养皿、酒精灯、吸水纸、0.000 5 g/mL秋水仙素、各浓度乙醇，1 mol/L HCl，45%醋酸，Carnoy固定液，醋酸洋红染色液、中性树胶。

（二）材料

洋葱或大蒜根尖等。

（三）操作步骤（以洋葱根尖压片为例）

（1）取材　取根冠以上的生长区1～2 cm，并把根冠和伸长区切除。

（2）预处理　用秋水仙素处理2～12 h。

（3）固定　用Carnoy固定液固定2～24 h（低温固定的效果较好，可4 ℃固定24 h）。经固定后的材料用90%乙醇漂洗，换至70%乙醇中于4 ℃长期保存。以固定后立即压片的效果最好。

（4）解离　固定后的材料依次浸入50%乙醇、30%乙醇、蒸馏水中洗涤，转入1 mol/L的HCl中，60 ℃恒温处理5～20 min。如果以后要进行孚尔根染色，则温度变化严格控制在±1 ℃之间。

（5）压片与染色　取根尖置载玻片上，用镊子或刀片截除根冠和伸长区，只留1～2 mm的分生区，加约1滴醋酸洋红染色液进行染色，染色时用镊子尖端将材料分割成若干小碎块，这样可加速染色和使染色内外均匀。

（6）分色与软化　染色完成后，用吸水纸小心吸去多余染色液，然后滴1滴45%醋酸，使材料分色和软化。完成后加盖盖玻片并吸去盖玻片周围多余的醋酸。

（7）分散　左手按住盖玻片，右手用小镊子柄部在盖玻片上对准根尖轻轻敲打，使细胞均匀散开。必要时也可用手指对盖玻片施加适度压力，常会得到十分满意的结果。注意手指压力不可过大，否则会压破细胞，造成染色体的流失、断裂或卷曲变形。(www.xing528.com)

（8）冷冻　把玻片放入冰箱中的冰室内冷冻0.5 h或在半导体制冷器上冷冻10 min。

（9）脱水　用刀片迅速揭下盖玻片，依次浸入50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中进行梯度乙醇脱水，每种试剂中停留5 min。

（10）透明　依次浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中进行透明，各10 min。

（11）封藏　用中性树胶封片。

染色结果：细胞核深红色，细胞质浅红色。

（四）思考题

制备洋葱根尖压片取材时为什么只留分生区，而去掉根冠和伸长区？

（五）实验报告

1．你的实验结果（贴图）

2．实验总结（心得与体会）