(一)用具与药品
解剖针2支、载玻片、盖玻片、吸水纸、Ringer液、醋酸地衣红染色液、各浓度乙醇、二甲苯、中性树胶。
(二)材料
果蝇三龄幼虫或摇蚊幼虫。
(三)操作步骤(以果蝇幼虫为例)
(1)取材 取洁净载玻片1张,加1滴Ringer液于载玻片上,把幼虫放在此液左方。将载玻片放在双目解剖镜下(衬以黑色背景更易于观察),左手持解剖针固定虫体尾端,右手持另一解剖针插入口部中央向右稳拉,拉出的唾液腺浸在Ringer液中。唾液腺为两条白色透明香肠状物,连在食道两侧。用2支解剖针将唾液腺以外的结构及脂肪去掉。
(2)染色 另取一洁净载玻片(如制永久制片需涂蛋白甘油),滴醋酸地衣红染色液1滴,以右手持针将解剖出来的唾液腺移至染液中,浸染5 min。
(3)压片 将盖玻片轻放在染液上,上覆吸水纸,用右手食指在纸上往返擦拭,去掉过多的染液,然后再换一张干净的吸水纸,以手指用较大的压力把腺体压碎,至盖玻片下呈很浅的粉红色为止。显微镜下观察可看到染色体散得很好,并有清晰的条纹。注意在染色前不要使腺体干燥,否则难以得到优良的制片。
(4)封片 以熔化的石蜡将盖玻片封起来,可保存数星期。如要制成永久制片,需在第3步后进入第5步继续。
(5)固定 将载玻片及盖玻片一起放在盛有少量(约1 cm高)纯乙醇的染色缸中,盖严,用乙醇蒸气处理12~24 h,然后全部浸入纯乙醇中1 h后,用针轻轻挑开盖玻片。(www.xing528.com)
(6)脱水 将分离后的盖玻片及载玻片均置于100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中进行脱水,各30 min。
(7)透明 依次浸入50%二甲苯、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中进行透明,各30 min。
(8)封藏 用中性树胶封片。
染色结果:染色体的明带呈浅红色,暗带呈深红色。
(四)思考题
要得到一张好的染色体压片,制作过程中需注意哪些细节?
(五)实验报告
1.你的实验结果(贴图)
2.实验总结(心得与体会)
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