优化血细胞涂片实验方法及思考题

（一）用具与药品

一次性塑料注射器、载玻片、盖玻片、乙醇棉球、记号笔（或蜡笔）、吸水纸、甲醇、蒸馏水、pH6.4～6.8的磷酸缓冲液、瑞氏－吉姆萨染色液、中性树胶。

（二）材料

鱼、蛙或蟾蜍、蜥蜴、兔等脊椎动物。

（三）操作步骤（以血细胞涂片为例）

（1）采血　先用浸湿的毛巾把鱼固定，用乙醇棉球轻轻擦拭取血插针部位，然后用一次性注射器从鱼的尾部血管抽取血液。

（2）涂片　取一张洁净的载玻片平放于实验台上，用注射器弃去第一滴血液后再在载玻片上靠近一端滴一小滴血液，另用一张边缘光滑的洁净载玻片，以其末端边缘置于血滴左线，然后稍向后退，血液就充满在两载玻片的斜角中，再以30°角（斜度愈小，涂片愈薄）向左边推动（图2-9），即涂成血液薄膜。推动时用力不能太大，要均匀并保持一定的速度。过慢，涂片则较厚。注意不能反复涂抹。

（3）干燥　手持涂片在空气中来回摇晃几次，以加速其干燥。

（4）固定　待涂片完全干燥后，放入固定液甲醇中固定5 min。

图2-9　血细胞涂片过程示意图

（5）染色　从固定液中取出后，如涂片数量多则用染色缸染色（简称缸染），如数量少，为节省染液，可将染色区域用记号笔（或蜡笔）圈起，将染液直接滴于血膜上染色（简称滴染）。用瑞氏－吉姆萨染色液染色约2 min，加等量磷酸缓冲液分色3 min。

（6）冲洗　倾去染液，蒸馏水冲洗至血膜呈淡紫红色。

（7）干燥与封片　直立晾干或37 ℃烘干，中性树胶封片。(www.xing528.com)

染色结果：红细胞的细胞核呈紫红色，胞质呈橘红色；中性粒细胞胞质为粉红色或无色，内含细小的紫红色或无色颗粒，核分叶；淋巴细胞的细胞核圆形，呈深紫色，胞质少，呈天蓝色；单核细胞核椭圆形至马蹄形，胞质呈灰蓝色（图2-10）。

牛蛙的血涂片中嗜酸性粒细胞内的颗粒呈砖红或橘红色，嗜碱性粒细胞内的颗粒呈蓝黑色或黑色（图2-11）。

也可以通过涂片的方式制备精液显微标本，在显微镜下观察其形态（图2-12）。

图2-10　胭脂鱼外周血细胞

图2-11　牛蛙的各类血细胞

图2-12　南方鲇精子涂片

（四）思考题

1.为什么血液应滴在载玻片2的后方而不是前方？

2.一张制备良好的血细胞涂片应具备哪些特点？

（五）实验报告

1．你的实验结果（贴图）

2．实验总结（心得与体会）