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原生动物整体制片技术实验

时间:2023-06-26 理论教育 版权反馈
【摘要】:(一)用具与药品试管、离心机、滴管、载玻片、盖玻片、蛋白甘油、碘酒、Schaudinn固定液、各级乙醇、1%酸乙醇、硼砂洋红染色液、二甲苯、中性树胶。把草履虫的集中液用滴管滴在载玻片上,大约经过24 h,使液滴彻底干燥,此时草履虫紧贴于载玻片上。继续脱水将载玻片依次浸入80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中进行梯度脱水,每种试剂中停留约2 min。

原生动物整体制片技术实验

(一)用具与药品

试管离心机、滴管、载玻片、盖玻片、蛋白甘油、碘酒、Schaudinn固定液、各级乙醇、1%酸乙醇、硼砂洋红染色液、二甲苯、中性树胶。

(二)材料

草履虫、眼虫或变形虫等。

(三)操作步骤(以草履虫为例)

(1)收集虫体 将草履虫连同培养液放到试管中,离心使虫体沉于管底。

(2)滴片 取干净的载玻片,滴上一小滴蛋白甘油(粘片剂),用干净手指涂抹于载玻片上(尽量薄而均匀)。把草履虫的集中液用滴管滴在载玻片上,大约经过24 h,使液滴彻底干燥,此时草履虫紧贴于载玻片上。

(3)固定 将载玻片浸入Schaudinn固定液固定l h。

(4)脱水及去汞 将载玻片依次浸入50%乙醇、70%乙醇(加1滴碘酒,以去除汞色素)、70%乙醇,每种试剂中停留约2 min。

(5)染色 用硼砂洋红染色,约30 min。

(6)脱色 用1%酸乙醇脱色,约1 min。

(7)继续脱水 将载玻片依次浸入80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ中进行梯度脱水,每种试剂中停留约2 min。(100%无水乙醇分为Ⅰ、Ⅱ,顺序不能互换,因此用Ⅰ和Ⅱ来区分。后文凡是标有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……的均类似。)(www.xing528.com)

(8)透明 将载玻片依次浸入50%二甲苯(无水乙醇与二甲苯等体积混合)、100%二甲苯Ⅰ、100%二甲苯Ⅱ中进行透明,每种试剂中停留约5 min。

(9)封藏 用中性树胶封片。

染色结果:草履虫内部结构被染成深浅不同的红色(图2-1)。

眼虫或变形虫等的内部结构也呈现深浅不同的红色。

图2-1 草履虫

(四)思考题

1.为什么滴片后要待液滴彻底干燥后才能进行固定?

2.为什么染色后还要进行脱色?

(五)实验报告

1.你的实验结果(贴图)

2.实验总结(心得与体会)

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