常用固定液及其应用范围

一、甲醛固定液

1.中性甲醛液

配方

此液是动物组织常用固定液。固定24～48 h，流水冲洗过夜，后续可制备冷冻切片，也可制作石蜡切片。

2.10%甲醛溶液

将10 mL甲醛加入90 mL蒸馏水混匀即可。可固定较大块组织，但长时间固定可能产生福尔马林色素。

3.甲醛－生理盐水液

配方

该液应用最广，可保护脂类和细胞核。作酸性染色时如V-G（Van Gieson）染色或三重染色之前，还可用此液进行第二次固定。氯化钠可根据不同动物适量减少。

4.甲醛－钙溶液

配方

一般固定24～48 h后流水冲洗过夜，可冷冻切片或丙酮脱水石蜡切片。

5.甲醛－溴化铵液

配方

此液用前现配，为中枢神经（脑）组织的良好固定剂，一般固定24～48 h，可用于镀金和镀银方法。

6.Dafano液

配方

此液固定高尔基体效果较好，流水冲洗以后脱水。

7.Mossman液

配方

此液用于哺乳动物胚胎，它的渗透速度很快，兼有脱钙作用。

8.Houseby液

配方

此液对细胞质精细结构的保存效果较好。固定12～24 h，水冲洗8～12 h。

二、氯化汞固定液

此类固定液固定后的处理过程中必须脱汞。

1.Helly液

配方

甲醛临用时加入。此液对细胞质固定效果较好，特别适于显示某些特殊颗粒，如胰岛和腺垂体以及骨髓、脾、肝等组织的固定。

2.Zenker液

将Helly液中的甲醛换成冰醋酸（5 mL）即可。冰醋酸临用时加入。适用于一般组织，能使细胞核和细胞质染色较为清晰，固定时间12～36 h。

3.Maximov液

将Helly液中的甲醛增至10 mL，即为Maximov液。甲醛稍有促染细胞质的作用，氯化汞能增强细胞核的染色效果。

4.甲醛－醋酸钠（钙）－氯化汞液

配方

此液临用时配制，适于固定胰腺组织，对鉴别胰岛细胞有较好的作用。

5.Stieve液

配方

此液渗透力强，固定10～18 h，固定后不需水洗。适于固定的组织种类较多，不宜固定酶原颗粒及胰腺组织。

6.Heidenhain液（Susa液）

配方

对较硬的组织特别有用，如蛔虫、昆虫幼虫等角层较厚的组织均可采用。它的渗透速度快，固定3～4 h，固定后直接投入95%乙醇。对细胞质及核的固定与染色效果良好，对结缔组织纤维保存效果较差。

7.Romeis液

配方

甲醛临用时加入。固定12～24 h，固定后转入90%乙醇。此液既可作一般固定液，也可作重固定液。这种重固定液特别有利于Heidenhain铁（矾）苏木精染色。

8.Gilsen液

配方

用时现配，24 h后失效。适于肉质菌类，特别是柔软胶质状的材料，如木耳。也适用于无脊椎动物材料。

9.Schaudinn液

配方

冰醋酸临用时加入。适用于固定原生动物、具鞭毛的单细胞藻类、植物的精子和游动孢子。若固定涂片，可在40 ℃下固定10～20 min。亦可将此液加热至70 ℃，直接将材料固定在载玻片上，固定时间为6～16 h。

三、苦味酸固定液

1.Bouin液

配方

常用固定剂，其渗透力强。组织固定均匀且收缩较少。固定12～24 h为宜。对肾结构保存不利。

2.Gendre液

配方

室温固定1～4 h，不超过12 h。固定后于95%乙醇中洗。

3.Rossman液

配方

对糖原固定效果较好。固定12～24 h，固定后于95%乙醇中洗。

4.Verhoeff液

配方

此液固定眼球48 h，即可进行脱水。(https://www.xing528.com)

5.苦味酸－硫酸液

配方

此液适用于胚胎固定，待别是对鸡胚固定效果很好。固定24 h为宜。

四、重铬酸钾固定液

1.Müller液

配方

此液作用缓慢。组织固定均匀且收缩少。多用于媒染和硬化神经组织，固定时间数日至数周，其间须常换新液。

2.Orth液

必须用前现配。在Müller液（上述配方）中加甲醛10 mL即为Orth液，甲醛临用前加入。此液为较好的常规固定剂，神经组织、胚胎和脂肪等均可应用。它渗透力极强，组织收缩较少。应在暗处固定12～24 h或更长时间。变黑则失效。固定后流水冲洗10～24 h，用70%乙醇长期保存。

3.Kolmer液

配方

此液由于含有钠盐，适用于固定整个眼球及神经组织。固定时间约24 h。

4.Goldsmith液

配方

此液对鸟类胚胎固定效果较佳，固定时间2～24 h，最好用铁苏木精染色液染色。

5.Smith液

配方

配制后立即使用。适于固定多卵黄的材料，用于蛙卵的固定效果更佳。固定24～48 h，流水冲洗过夜。

五、乙醇固定液

1.Carnoy液

配方

现配现用。此液能固定细胞质和细胞核，尤其适于固定染色体、中心体。用于有丝分裂过程的切片固定最适宜。常用于糖原及尼氏体的固定。小块的组织固定20～40 min较好，较大的材料固定3～4 h。

2.Lillie液

配方

用前临时配制。处理同Carnoy液。

3.甲醛-乙醇-冰碏酸液（FAA液）

配方

植物组织除单细胞及丝状藻类外均适用，也适于昆虫和甲壳类的固定，但不适于细胞学研究。此液配制视材料性质而异，如固定木材可略减冰醋酸，略增甲醛。易于收缩的材料可稍增冰醋酸。固定时间最短18 h，也可无限延长。木质小枝至少固定一周。如用于植物胚胎材料则减少1 mL乙醇，增加1 mL冰醋酸。

4.乙醇-甲醛液（AF液）

配方1：将10 mL甲醛加入90 mL95%或无水乙醇中。此液兼有脱水作用，固定后材料可直接入95%乙醇脱水。适用于皮下组织中肥大细胞的固定。

配方2：将6～10 mL甲醛加入100 mL70%乙醇中。此液适于植物切片，特别适用于观察花柱中的花粉管。固定后的材料组织可在此液中长期保存。

六、锇酸固定液

1.Flemming强液

配方

临用时现配。它的渗透力极弱，小块组织固定24～48 h。适于固定脂肪组织。组织保存于80%乙醇。固定的组织需流水冲洗24 h，染色前需经漂白处理，对番红及苏木精着色较好。

2.Altmann液

将0.05 g/mL 10 mL重铬酸钾水溶液和10 mL2%锇酸水溶液混匀即可。临用时现配。为线粒体、脂肪的良好固定剂，小块组织固定24 h，流水冲洗24～48 h。用于固定白细胞颗粒效果较好。

3.Champy液

配方

此液可长期贮存，主要用于线粒体， 但穿透力较差，组织块宜小。固定6～24 h，流水冲洗过夜。

4.Beda液

配方

此液用于研究花粉母细胞减数分裂前期效果较好。固定时间15 min～24 h。

七、铬酸－醋酸固定液

根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方。

配方

弱液：用于固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12～24 h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至1 h。

中液：用于固定根尖、茎尖、未成熟子房和胚珠等。为了易于渗透，可在此液中加入0.02 g/mL的麦芽糖或尿素。固定时间12～24 h。

强液：用于固定木质根、茎、成熟子房等。为了易于渗透，可在此液中加入2%的麦芽糖或尿素。固定时间12～24 h或更长。

八、常用电镜固定液

1.2.5%戊二醛磷酸缓冲液固定液

配方

此固定液pH值为7.4。固定时间1～2 h。经此固定液固定后，组织块须用0.1 mol/L磷酸缓冲液洗脱3～12 h，其间更换缓冲液数次。

2.2.5%戊二醛二甲胂酸钠缓冲液固定液

配方

此固定液pH值为7.2～7.4。固定1～2 h。经此固定液固定后，组织块须用0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液洗脱3～12 h，其间更换缓冲液数次。

3.多聚甲醛－戊二醛混合固定液

配方

先将多聚甲醛和双蒸水加热至60～70 ℃，混合成乳状，再加入氢氧化钠使其透明。冷却后再加入其他试剂。经此液固定1～2 h后，须用0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液洗3～12 h。

4.1%锇酸固定液

配方

用时A液和B液按1∶1混匀。pH值为7.3 ～ 7.4。可用0.11 mol/L的 HCl水溶液和0.28 mol/L的巴比妥钠水溶液调pH值。置于冰箱内可保存1～2周。变色后不可使用。