测定有机磷农药残留的方法优化

（一）定性检验

1.原理

通常情况下胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸和靛酚（蓝色），有机磷类或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变。因此，可根据试剂颜色的变化情况，判断出样品是否含有有机磷类或氨基甲酸酯类农药。

2.试剂

（1）固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的纸片（速测卡）。

（2）pH=7的缓冲溶液。将15.0g磷酸氢二钠（Na2HPO4·H2O）和1.59g无水磷酸二氢钾（KH2PO4）溶于500mL蒸馏水中。

3.仪器

常量天平（有条件配备37℃±2℃恒温装置）。

4.操作步骤

（1）整体测定法。选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成0.5cm左右见方的碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上。取一片速测卡，用白色药片蘸取提取液，在37℃温放置10min，使红色药片与白色药片叠合反应。每批测定应设一个缓冲液的空白对照。

（2）表面测定法（粗筛法）。擦去蔬菜表面泥土，滴2～3滴缓冲溶液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴处轻轻摩擦。取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。在37℃恒温放置10min，预反应的药片表面必须保持湿润。将速测卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合反应。每批测定应设一个缓冲液的空白对照。

（3）结果判断。结果以胆碱酯酶被有机磷类或氨基甲酸酯类农药抑制为阳性，未抑制为阴性表示。白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果，白色药片变为天蓝色为阴性结果。阳性结果样品可用其他分析方法进一步确定具体农药品种和含量。

5.说明及注意事项

（1）本法为GB/T5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》的方法。

（2）韭菜、生姜、葱、蒜、胡萝卜、辣椒等蔬菜中，含有破坏酶活性或使蓝色产物褪色的物质，处理这类样品时，不要剪得太碎，浸提时间不要太长，必要时可采取整株蔬菜浸提的方法。

（3）当温度条件低于37℃，酶反应的速度随之放慢，药片加液后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以空白对照卡用手指（体温）捏3min时可以变蓝，即可往下操作。注意样品放置的时间与空白对照卡放置的时间一致才有可比性。

（4）空白对照卡不变色的原因可能有两种：一是药片表面缓冲液加得少，预反应后的药片表面不够湿润；二是温度太低。

（二）定量检侧

1.原理

样品中有机磷类农药经乙腈提取，提取溶液经净化、浓缩后，用双塔自动进样器同时注入气相色谱的两个进样口，样品中组分经不同极性的两根毛细管柱分离，火焰光度检测器（FPD）检测。外标法定性、定量。

2.试剂

（1）乙腈。

（2）丙酮。重蒸。

（3）氯化钠。140℃烘烤4h。

（4）滤膜。0.2μm。

（5）铝箔。

（6）农药标准品，见表6-1。

3.仪器

（1）漩涡混合器。

（2）匀浆机。

（3）氮吹仪。

（4）气相色谱仪，带有双火焰光度检测器（FPD），双塔自动进样器，双毛细管进样口。

4.操作方法

（1）农药标准液配制。(www.xing528.com)

①单一农药标准液。准确称取一定量某农药标准品，用丙酮稀释，逐一配制成26种农药。l000mg/L的单一农药标准储备液，储存在-18℃以下冰箱中。使用时根据各农药在对应检测器上的响应值，吸取适量的标准储备液，用丙酮稀释配制成所需的标准工作液。

表6-1　26种有机磷农药标准品

续表

②农药混合标准液。将26种农药分为4组，按照表中组别，根据各农药在对应检测器上的响应值，逐一吸取一定体积的同组别的单个农药储备液分别注入同一容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。采用同样方法配制4组农药混合标准储备溶液。使用前用丙酮稀释成所需浓度的标准工作液。

（2）样品制备。取不少于1000g蔬菜或水果样品，取可食部分用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物。采用对角线分割法，取对角部分，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎，制成待测样，放入分装容器中备用。

（3）提取、净化。准确称取25.0g试样放入匀浆机中，加入乙腈50.0mL，高速匀浆2min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5～7g氯化钠的100mL具塞量筒中，收集滤液40～50mL。盖上塞子，剧烈振荡1min，在室温下静置10min，使乙腈相和水相分层。

从100mL具塞量筒中，吸取10.00mL乙腈溶液，放入150mL烧杯中，将烧杯放在80℃水浴锅上加入，杯内缓缓通入氮气或空气流，蒸发近干，加入2.0mL丙酮，盖上铝箔待测。

将上述烧杯中用丙酮溶解的样品，完全转移至15mL刻度离心管中，再用约3mL丙酮分3次冲洗烧杯，并转移至离心管，最后准确定容至5.0mL，在旋转混合器上混匀，供色谱测定。如样品过于浑浊，应用0.2μm滤膜过滤后再进行测定。

（4）样品测定。

①色谱参考条件。

a.色谱柱。

预柱：1.0m，53mm内径，脱活石英毛细管柱。

A柱：50%聚苯基甲基硅氧烷（DB-17或HP-50+）柱，30m×0.53mm×1.0μm。

B柱：100%聚甲基硅氧烷（DB-1或HP-1）柱，30m×0.53mm×1.50μm。

b.温度。进样口温度220℃。检测器温度250℃。程序升温：150℃（保持2min），8℃/min升温至250℃（保持12min）。

②气体及流量。载气：氮气，纯度≥99.999%，流速10mL/min。燃气：氢气，纯度≥99.999%，流速75mL/min。助燃气：空气，流速100mL/min。

③进样方式。不分流进样。样品一式两份，由双塔自动进样器同时进样。

④由自动进样器吸取1.0μL标准混合溶液（或净化后的样品）注入色谱仪内，以双柱保留时间定性，以分析柱B获得的样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。

5.结果计算

双柱测得的样品中未知组分的保留时间分别与标样在同一色谱上的保留时间相比较，如果样品中某组分的两组保留时间与标准中某一农药的两组保留时间都相差在±0.05min内，可认定为该农药。样品中被测农药残留量以质量分数计，按下式计算：

式中：w——被测农药残留量，mg/kg；

ψ——标准溶液中农药的含量，mg/L；

A——样品中被测农药的峰面积；

As——农药标准溶液中被测农药的峰面积；

V1——提取溶剂总体积，mL；

V2——吸取出用于检测的提取溶液的体积，mL；

V3——样品定容体积，mL；

m——样品的质量，g。

计算结果保留三位有效数字。

6.说明及注意事项

（1）本法为NY/T761.1-2004《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸类农药多残留检测方法》中的第一部分，适用于水果和蔬菜中26种有机磷类农药多残留检测。

（2）本方法所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯；水为蒸馏水。

（3）本方法的检出限在0.0010～0.2500mg/kg。