由于APEO沸点高、难挥发，因此，现有的关于纺织品及皮革中APEO的检测方法通常是以液相色谱分离为基础的直接进样分析法。另外，由于APEO良好的表面活性，萃取后的样液难以进行有效的净化处理，因此样品的前处理过程也仅包含溶剂（甲醇）萃取。下面先以标准SN/T 1850.1-2006、GB/T 23322-2009和ISO18254－1-2016的内容为基础，对纺织品中APEO的LC－MS的检测过程进行说明。
（一）纺织品中APEO含量的检测
1. 样品萃取及样液的浓缩
（1）索氏抽提法萃取
取代表性试样，剪碎成约5mm×5mm，混匀。从混合样品中称取1g（精确至0.01g），置于索氏抽提器中，加入约150mL甲醇到接收瓶中，进行加热回流，控制流速1~2滴/s，共抽提3h。收集抽提液，旋转蒸发浓缩至干，再准确加入2mL的甲醇溶解残留物，用0.45μm聚酰胺滤膜过滤后，进行仪器分析。
（2）超声波辅助甲醇萃取
取代表性试样，剪碎成约5mm×5mm，混匀。从混合样品中称取1g（精确至0.01g），置于具塞锥形瓶中，加入20mL甲醇，将锥形瓶加塞后置于70℃的超声波水浴中，超声萃取60min，取出锥形瓶，冷却至室温，用聚酰胺滤膜过滤出1mL样液，进行仪器分析。
2. 仪器分析
（1）基于HPLC－FLD的检测
由于APEO分子中含有苯氧基单元，故可采用灵敏度较高的荧光检测器（FLD）进行。采用反相液相色谱对样液中APEO（NPEO和OPEO）含量进行分析时，所得到的色谱图中，NPEO和OPEO的色谱图为各自同系物的“共流出”峰的集合，如图6－2所示。基于相同色谱条件下NPEO/OPEO的标准工作曲线，对样液中NPEO/OPEO的含量进行计算。
图6－2 NPEO/OPEO标准品的反相HPLC－FLD色谱图
NPEO/OPEO的HPLC分析条件如下：
• 色谱柱：XDB C18（5μm），250mm×4.6mm；
• 柱温：35℃；
• 流速：恒流，1.0 mL/min；
• 流动相：甲醇/乙腈/水＝81/6/13；
• 荧光检测器：激发波长230nm，发射波长296nm；
• 进样体积：10μL。
（2）基于LC－MS的检测
由于质谱定性的可靠性远高于荧光检测器，因此LC－MS被认为是分析APEO的最有力工具。可用于分析NPEO/OPEO的LC－MS色谱条件和质谱条件如下。
色谱条件：
• 色谱柱：ODS C18（3.5μm），150mm×2.1 mm；
• 柱温：40℃；
• 流速：恒流，0.3 mL/min；
• 进样体积：2μL；
• 流动相：A为甲醇，B为乙酸铵溶液（5mmol/L）；
• 流动相梯度：见表6－4。
表6-4 LC-MS分析APEO的HPLC流动相梯度
质谱条件：
• 离子源：电喷雾离子源（ESI）；
• 扫描方式：正离子模式；
• 干燥气流速：8 L/min；
• 干燥器温度：325℃；
• 质量扫描范围：100~1200（质荷比）；
• 检测模式：一级SIM或EIC，NPEO/OPEO的选择监测离子见表6－5。
表6-5 NPEO/OPEO的选择监测离子(www.xing528.com)
该LC－MS条件下，所得到的NPEO/OPEO的LC－MS色谱图及质谱图如图6－3所示。
图6－3 NPEO/OPEO标准品的LC－MS色谱图和质谱图
（a）色谱图（b）质谱图
（二）皮革中APEO含量的检测
目前皮革中APEO含量的检测方法分为基于液相色谱分离的直接进样检测法（ISO 18218－1-2015）和基于化学裂解处理的间接检测法（ISO 18218－2-2015）。实际应用表明，一般情况下，两种方法的检测结果基本一致。但两种方法的操作过程有较大的差异，内容概括如下。
1. 基于液相色谱分离的直接进样检测法
该方法采用超声波辅助甲醇对剪碎后的样品进行萃取，分离出萃取液后，采用LC－MS对样液进行测试，技术内容与上述的超声波萃取几乎完全相同。具体如下：取代表性试样，剪碎成约4mm×4mm，混匀，从混合样品中称取1g（精确至1mg），置于具塞锥形瓶中，加入10mL甲醇，在70℃条件下超声萃取60min，用0.22μm聚酰胺滤膜过滤后，进行LC－MS分析，LC－MS条件同上所述。
2. 基于化学裂解处理的间接检测法
该方法采用超声波辅助乙腈萃取法对样品中的目标物进行萃取，萃取液中的APEO先经过碘化铝化学裂解转化为AP，然后通过液液萃取将AP分离出，通过GC－MS对分离出的AP进行检测。由于该方法未直接对APEO进行检测，而是对APEO分子中的特征单元AP进行检测，所以称为间接检测法。具体操作如下：
① 样品萃取：准确称取2.5g剪碎后的试样（精确至0.1mg），与5g无水硫酸钠混合后，装入150 mL锥形瓶中，然后准确加入50 mL乙腈，加塞后置于超声波发生器中，连续处理60min；取出锥形瓶，冷却至室温；萃取液通过玻璃纤维过滤器过滤后，收集滤液。
② 化学裂解处理：准确移取10 mL三碘化铝溶液（0.1 g/mL的二硫化碳溶液）于100 mL平底烧瓶中，将烧瓶置于90℃的油浴锅中，使其中的溶剂挥发近干，然后快速加入10 mL样品滤液，并将烧瓶再置于90℃的油浴锅中，加热回流10 min。
上述使用的三碘化铝溶液也可以在实验室中自行制备，操作如下：称取3.2 g碘、0.4 g铝片于烧瓶中，加入10 mL乙腈后，于90℃油浴锅中加热回流至瓶内颜色消失（约2h）。烧瓶底部的白色物质为三碘化铝，然后直接向该烧瓶中加入10mL样品滤液进行试验。
③AP的分离：移出烧瓶，向其中缓慢加入20 mL蒸馏水，冷却至室温，然后将瓶中的液体转移至分液漏斗中，用40mL正己烷进行两次萃取（每次20mL），合并分离出的正己烷萃取液，滴加饱和硫代硫酸钠溶液并振荡至溶液颜色消失，分离出正己烷，经无水硫酸钠脱水后，旋转蒸发至近干；准确加入2 mL正己烷溶解残留物，溶液用聚酰胺滤膜过滤后进行GC－MS测定，统计AP的色谱峰面积。
④ 标准工作曲线绘制：准确移取10 mL的APEO标准工作液（乙腈配制，2~30mg/L），按照上述“化学裂解处理”及“AP的分离”操作测定最终样液中AP的GC－MS色谱峰面积，根据AP色谱峰面积和APEO浓度的对应关系，绘制标准工作曲线，至少5个浓度点。
⑤ GC－MS测试条件：
气相色谱（GC）条件如下：
• 进样系统：不分流；
• 载气：氦气；
• 进样体积：1μL；
• 毛细管色谱柱：30m×0.25mm（内径）× 1μm（膜厚），如DB－5ms石英毛细管柱；
• 气体流量：1.0 mL/min；
• 进样口温度：280℃；
• 色谱质谱接口温度：250℃；
• 柱温：80℃保持1min，10℃/min升温至280℃，保持10min。
质谱（MS）条件如下：
• 电离方式：EI；
• 电离能量：70 eV；
• 检测方式：选择离子监测， m/z（NP）＝107、121、135、149， m/z（OP）＝135、205；
• 质量扫描范围：50~300（质荷比）；
• 离子源温度：230℃；
• 四级杆温度：150℃；
• 溶剂延迟：5 min。
上述GC－MS条件下，所得到的OP和NP色谱图及质谱图如图6－4所示。其中OP为单峰形貌，而NP表现为多峰形貌。NP的多峰形貌源于其同分异构体的色谱分离性能的差异。
图6－4 烷基酚（OP/NP）的GC－MS色谱图及质谱图
（a）色谱图（b）OP质谱图（c）NP质谱图
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