测定番茄红素含量的实验——番茄制品

一、实验目的

（1）学习用分光光度计测定番茄中番茄红素的原理与方法。

（2）通过对实验结果的分析，了解影响测定准确性的因素。

二、实验原理

番茄红素分子中的碳骨架是由8个异戊二烯单位连接而成的，是四萜类化合物。它的分子中都有一个较长的π-π共轭体系，能吸收不同波长的可见光，因而，番茄红素是红色物质，所以，又把它叫做多烯色素。番茄红素的分子式均为C₄₀H₅₆，相对分子质量为536.85，番茄红素的熔点是174℃。根据番茄红素的上述性质，可利用石油醚、乙酸乙酯等弱极性溶剂将其从植物材料中浸提出来。然后，根据它对吸附剂吸附能力的差异，用柱色谱进行分离，用薄层色谱检测分离效果。并根据其在可见光区有强烈吸收的性质，用紫外—可见分光光度法进行测定。实验试样经甲醇提取去除黄色素，再用甲苯提取番茄红素，用比色法测定。以苏丹Ⅰ替代番茄红素标准品制作标准曲线进行定量。

三、实验材料、仪器与试剂

1.材料

番茄及其制品。

2.仪器

分光光度计、电子分析天平（感量为0.1mg）、漏斗、定性快速滤纸（9cm）、100mL棕色容量瓶。

3.试剂

本方法所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682-2008中规定的三级水。

（1）苏丹Ⅰ标准品 纯度≥92%，使用前于105℃烘2h。

（2）苏丹Ⅰ标准溶液 准确称取0.025g苏丹Ⅰ标准品，用无水乙醇溶解并定容到50mL。

另有，甲醇（分析纯）、甲苯（分析纯）、无水乙醇（分析纯）。

四、实验步骤

（1）取样

①番茄酱样品的称样量为0.2g，精确至0.0001g。

②新鲜番茄样品粉碎后取样1.0g，精确至0.0001g。

③番茄粉样品的称样量为0.1g，精确至0.0001g。

（2）测定

①样品制备

a.去除黄色素：按（1）中规定称取试样，置于50mL烧杯中，每次加入甲醇5～10mL洗脱黄色素，将洗脱液移入带滤纸的漏斗中过滤，重复洗脱5～7次，直至滤液无色。弃去滤液，保留残渣备用。

b.红素提取：将a中的滤纸和漏斗置于100mL棕色容量瓶上。每次向烧杯中加入5mL甲苯提取红色素，小心将甲苯提取液倒入漏斗中过滤。收集滤液于100mL棕色容量瓶中。重复上述提取5～7次，直至滤液无色。然后用滴管吸取甲苯，冲洗滤纸上存留的红素及少量样品颗粒，从滤纸上沿开始从上到下依次冲洗，直至滤纸及少量样品颗粒无色。最后用甲苯定容至100mL刻度，摇匀，待测。

②标准曲线制作：分别吸取苏丹Ⅰ标准品0.0、0.26、0.52、0.78、1.04、1.30mL于6只50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至刻度，得到相当于0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/mL浓度的番茄红素标准液。用1cm比色皿，无水乙醇为空白，在485nm下测定吸光度，绘制标准曲线，求出线性回归方程。(www.xing528.com)

③样品测定：按②中规定的方法测定样品，用标准曲线或回归方程求出试液含量。

（3）抗氧化剂BHT对样品测定以及标准溶液的稳定性的影响 在样品中加入BHT或不加BHT分别进行测定，比较其对番茄红素含量测定的影响。分别取一定体积的标准储备液配置成0.180、0.360、0.720、1.440、2.880μg/mL的两个标准系列，在一个系列中均加入50mg BHT，于室温下放置（并注意避光和隔绝空气），分别在0、1、2、4、8和24h末测定吸光度值，并进行方差分析。

五、结果与讨论

样品中番茄红素含量按式（8-34）计算：

式中 X——番茄红素的含量，mg/100g；

C——测试液中番茄红素的含量，μg/mL；

m——样品质量，g；

10——换算系数，mL。

精密度：同一样品的两次测定值之差；番茄粉＜6mg/100g，番茄酱＜2mg/100g。

六、注意事项

（1）由于番茄红素纯品价格昂贵，且极不稳定（需-70℃保存），苏丹Ⅰ的吸收波长与番茄红素的吸收波长相近，本方法以苏丹Ⅰ替代番茄红素标准品制作标准曲线。

（2）应避免静电影响，使用牛角勺，在相对干燥的环境中尽快完成称量操作。

（3）番茄红素对光、热、紫外线较敏感，全部操作过程应避光，并尽快完成。

（4）用玻棒顶端碾压样品即可，避免样品过于分散并粘附在杯壁上。

（5）尽可能地使样品保留在杯底，避免样品在甲醇洗脱结束前移入漏斗。

（6）将样品保留在烧杯中，尽肯能将烧杯中的残留提取液全部倒入漏斗中。再用滴管吸取甲醇溶液冲洗滤纸上残留的黄色素，直至滤纸无色（保留该滤纸用于番茄红素的提取）。

（7）尽可能地将样品保留在杯底，避免样品在红色素提取结束前过多移入漏斗。

思考题

1.番茄酱样品处理方法有哪些？

2.如果是用番茄红素纯品做标准曲线，请写出实验方案。

3.实验中要注意的事项有哪些？

参考文献

[1]李世雨，于千，尚德军．出口番茄制品检验[M].北京：中国计量出版社，2010.

[2]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会．GB/T 14215-2008 番茄酱罐头[S].北京：中国标准出版社，2008.