植物色素分离实验：薄层层析法

一、实验目的

学习薄层层析的基本原理及操作方法。掌握用硅胶G分离油脂中色素。

二、实验原理

硅胶对色素有一定的吸附，色素在混合溶剂（展层剂）中的分配系数不同，当展层剂通过油脂原点冰向前流动时，各色素由于吸附与解吸附速度差异和连续分配而被分开。

用标准色素定位可鉴定色素种类。

把色素斑点刮下溶解定容，可测定样品中色素含量。

三、实验材料、仪器与试剂

1.材料

植物色素。

2.仪器

玻璃板（4cm×15cm）、涂布器、毛细管、吹风机、烘箱、天平。

3.试剂

（1）硅胶G。

（2）展层剂（石油醚∶乙醚=92∶8）。

（3）植物色素 胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿素）。

四、实验方法

（1）硅胶预处理（购买已处理过的硅胶）500g硅胶与1000mL HCl（1∶1）一同浸泡数天，倾去上层清液，固体物用倾泻法水洗3次，最后抽滤，在漏斗上水洗至中性。再用300mL干燥的苯洗涤，在120℃干燥。

（2）铺板 用水将硅胶（硅胶∶水=1∶2～3，稍微静置，用玻璃棒推平）在烧杯中调成糊状，立即倒入干净的玻璃板上，用涂布器涂层（后0.25～1mm；玻棒涂布器沾水，朝一个方向），一定要平，120℃干燥（约15min）。

（3）点样 在玻板一端2cm处用毛细管轻点1滴样品。(www.xing528.com)

（4）展层 取烧杯倒入1cm深的展层剂，把玻板样点朝下、薄层朝上倾斜插入烧杯（加盖）。当溶剂前沿至顶端1cm时，取出。

（5）显色 热风烘干，观察。

（6）定量 略。

五、结果与讨论

移动由快到慢顺序为胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）、叶绿素a（蓝绿色）、叶绿素b（黄绿素）。

六、注意事项

薄层层析的R_f值受多种因素影响，即使严格按照实验要求做了，结果的重现性仍较差。因此，薄层定性时常与标准品一起点样进行对比分析。

思考题

1.薄层板的涂布要求是什么？为什么要这样做？

2.点样的要求是什么？为什么要这样做？

3.展开前层析缸内空间为什么要用溶剂蒸汽预先进行饱和？

4.在一定的操作条件下为什么可利用R_f值来鉴定化合物？

5.在混合物薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？

6.展开剂的高度若超过了点样线，对薄层色谱有何影响？

参考文献

[1]王镜岩，朱圣庚，徐长法．生物化学[M].北京：高等教育出版社，2002.

[2]李巧枝，程绎南．生物化学实验技术[M].北京：中国轻工业出版社，2010.