离体测试：控制实验条件更精准的MDL方法

与活体测试相比，离体测试（In Vitro Test）能够更好地控制实验条件和受试细菌、酵母菌、细胞状态，专注考察某一个或某几个特定MoA，排除其他因素干扰。但其缺点在于单纯的离体测试缺乏完整的生物体内代谢转化系统，难以全面真实地反映EDCs在机体内复杂的转化及毒理作用机制，不能有效地获得环境危害和生态风险信息。因此离体测试也常与活体测试和化学分析同步进行，以便进行对照和进一步评价。

ER-CALUX方法曾被用于荷兰地表水的雌激素效应检测，表明莱茵河和默兹河水样的雌激素当量（雌激素效应折合成标准物质17β-雌二醇的量，EEQ）分别为（0.22±0.08）ng/L和（5.73±1.77）ng/L［16］。另一份研究报道了荷兰多默尔河（Dommel）和Brabantse Biesbosch湿地欧鳊（Abramis Brama）血浆、肝脏和胃肠组织样品及水体沉积物的雌激素效应，结果显示欧鳊胃肠组织的雌激素效应最强，EEQ可高达（979±45）ng/L（多默尔河），肝脏和血浆次之，最大值约为200ng/L（多默尔河）和80ng/L（Brabantse Biesbosch），沉积物最低，EEQ仅在（0.1～1）ng/L数量级［22］。另外，Houtman等人发现雄性欧鳊胃肠组织的EEQ值和血浆VTG浓度呈现较好相关性（r-square=0.8），可作为生物标志物反映水体中类雌激素物质的ER结合能力。Murk等人利用三种离体测试方法——ER-CALUX、酵母雌激素筛选（YES）和ER竞争性结合考察了莱茵河（Rhine）和默兹河（Maas）四个采样点的雌激素活性，结果发现所有方法都能检测到雌激素效应，EEQ范围分别是0.25～1.72pmol/L、ND（低于检出线）～4pmol/L和ND（低于检出线）～9pmol/L［23］。

除ER-CALUX法外，E-screen法在雌激素效应筛查中也有广泛的应用。例如，Ra等人以MCF-7增殖为效应终点，评价了韩国荣山江和蟾津江流域样品的雌激素效应，发现两流域EEQ值分别在0.38～6.27ng/L和0.86～3.51ng/L范围内［24］。与ERCALUX法类似的还有检测雄激素效应的AR-CALUX法、检测孕激素效应的PRCALUX法和检测糖皮质激素效应的GR-CALUX法，它们也被用于内分泌干扰效应调查。Van der Linden及合作者利用以上四种CALUX检测法检测了荷兰地表水、行业废水和污水处理厂出水，结果显示一个溪流样品检出了全部四种效应，其EEQ、雄激素当量（DHT-EQ）、孕激素当量（Org-EQ）和糖皮质激素当量（Dex-EQ）分别为（0.5±0.2）ng/L、（12±2）ng/L、（4.5±1.7）ng/L和（1.3±0.2）ng/L。两个河流样品仅表现出雌激素和糖皮质激素活性，EEQ分别为（0.22±0.03）ng/L和（0.18±0.02）ng/L，Dex-EQ分别为（0.39±0.10）ng/L和（1.0±0.2）ng/L［25］。(www.xing528.com)

国内进行离体测试筛查使用更多的是单杂交和双杂交酵母筛选实验，如辽河流域利用重组ER的单杂交酵母YES进行了地表水雌激素效应检测，发现在21个采样点中，雨季有9个采样点检出雌激素效应，EEQ最高达到17.52ng/L；旱季有18个点检出雌激素效应，EEQ最高可达78.83ng/L［26］。Zhao等人在珠江流域进行了类似的实验，不仅用YES检测雌激素效应，发现EEQ在0.23～324ng/L范围内，还利用重组雄激素受体（AR）的酵母测试了样品的抗雄激素效应，结果显示表征抗雄激素效应的氟他胺当量（Flu-EQ）在20.4×103～935×103 ng/L［27-28］。Jiang等人调查了中国七大流域（松花江、辽河、海河、黄河、长江、淮河、珠江）饮用水源的内分泌干扰活性，双杂交酵母测试发现水样提取液具有ER诱导及抑制效应、AR抑制效应、甲状腺激素受体（TR）抑制效应、维甲酸受体（RXR）抑制效应、孕激素受体（PR）抑制效应和雌激素受体相关受体（ERR）诱导效应［29］。比起仅ER和ERR存在诱导效应，提取液的抑制效应更加普遍。