活体测试：探索EDCs对生物体的全面影响与挑战

活体测试（In Vivo Test）能够定量测定EDCs对某种特定生物的整体和实际效应，可以提供更多的生物效应信息。受试生物体内不同类别的细胞都可能对暴露作出不同机制的生物响应，综合地导致测试终点发生变化。正因如此，活体测试很难判断特定EDCs的靶位点和MoA，因为在生物体复杂的内分泌调节网络中，响应发生的位置和具体原因是难以确定的。

在毒理学研究中，鱼类的产卵和孵化率下降、后代畸形、血清蛋白浓度变化、两栖动物变态现象、大鼠子宫增重、青春期个体发育等测试终点经常被用以检测化合物的内分泌干扰效应或阐述作用机理。其中，卵黄蛋白原（Vitellogenin，VTG）相关指标在实际环境水体的评估中应用最多。VTG是一种存在于性成熟雌性卵生动物血浆中的高密度糖脂蛋白，雄性个体和幼体体内含量极低。外源雌激素和类雌激素暴露会诱导VTG生成，从而成为EDCs（主要是雌激素）的生物标志物。酶联免疫（ELISA）、高效液相色谱（HPLC）等方法均可用于VTG浓度测定，实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）可用于检测VTG转录水平（mRNA）变化。Bogers和Deguchi等人分别以雄性黑头呆鱼（Pimephales Promelas）和鲫鱼（Carassius Auratus）体内VTG浓度为观测指标，发现荷兰尼沃海恩市默兹河和日本静冈县某河水样经暴露显著诱导VTG产生，提示具有类雌激素效应［16］。Hashimoto等发现东京湾野生比目鱼（Pleuronectes Yokohamae）血清VTG含量与对照组（北海道比目鱼）相比有显著性差异，除此之外还报道了环境雌激素暴露导致的雄鱼雌性化现象，在精巢内观察到卵母细胞生成［17］。胡建英等检测了北京排污河天津段野生和养殖鲫鱼（Carassius Auratus）血浆VTG含量，浓度范围分别为0.284～5.971mg/mL和0.119～0.250mg/mL，说明北京排污河天津段的野生鲫鱼受到类雌激素污染物的暴露［18］。宋双双等发现浑河流域水环境中野生鲫鱼肝组织中VTGmRNA水平显著升高，说明浑河水体中类雌激素物质的存在已对野生鲫鱼内分泌系统造成干扰［19］。(www.xing528.com)

Cavallin及合作者研究了接受畜牧业废水的地表径流对雄激素和雌激素系统的干扰［20］。黑头呆鱼在48h半静态暴露后，考察其肝脏VTG和ERα表达水平、性腺睾酮和17β-雌二醇生成量，以及血浆VTG浓度改变。结果显示有样品导致雄性睾酮分泌水平增高，但对其他测试终点并无影响。在另一篇报道里，研究者们关注了肾上腺糖皮质激素干扰效应，发现亚利桑那州图森市污水处理厂二级出水提取物可导致斑马鱼（Danio Rerio）幼体和雄性斑马鱼肝脏糖皮质激素相关基因表达改变［21］。污水厂出水排入该地受纳水体，也相应提高了地表水中水生生物的内分泌干扰风险。