一、任务目标
（1）把麸曲产生的孢子接入摇瓶中，通过摇瓶培养得到液体种子，满足种子罐或实验室小规模发酵的需要。
（2）通过摇瓶种子的制备，熟悉和掌握淀粉液化及摇瓶种子制备方法，进一步巩固淀粉液化的概念和原理，明确了液体种子的质量要求。
二、材料器具
1. 材料
药品和试剂：（NH4 ）2 SO4 ，氢氧化钠，高温α-淀粉酶，0.1%的酚酞指示剂，0.1429mol/L氢氧化钠溶液。
菌种：黑曲霉麸曲孢子。
原料：山芋干粉。
2. 主要仪器设备
100目筛，精密pH试纸，量筒，烧杯，三角瓶，高压灭菌器，超净工作台，恒温摇床，无菌吸管，显微镜等。
三、任务实施
1. 种子培养基配制
称取山芋干粉（过100目筛）或淀粉100g、氢氧化钠5g、高温α-淀粉酶0.2g，加水至1000mL，混匀，pH自然。将培养基分装至三角瓶中，装液量为三角瓶体积的20%，6～8层纱布封口，121℃灭菌30min。
2. 接种培养
取成熟的黑曲霉麸曲孢子，无菌操作，挖去一块孢子培养基（约0.5cm2 ）接入已灭菌的种子培养基中，或接入1mL孢子悬液（浓度1×105个孢子/mL），于35℃、200r/min条件下培养24～36h。(www.xing528.com)
3. 质量检测
（1）质量要求：取一瓶镜检，镜检菌丝生长健壮，结成菊花形小球，球直径不超过100μm。无异味、无杂菌、无异常菌丝。pH 2.0～2.5，酸度1.5%～2.0%，柠檬酸含量0.5g/100mL左右。
（2）黑曲霉镜检。
（3）柠檬酸含量（总酸）的测定。
四、结果处理
五、注意事项
（1）摇瓶培养基不能过多，否则培养过程中黑曲霉需要的氧气供应不足，摇瓶培养过程中注意观察黑曲霉生长情况。
（2）用显微镜检测菌球的生长情况，若菌丝细长则说明黑曲霉已经提前进入柠檬酸发酵期，从而导致后期柠檬酸产量不足。
六、任务考核
（1）培养基配制、分装及灭菌操作无差错。（20分）
（2）接种操作正确，摇瓶放置的位置合理。（20分）
（3）镜检菌丝形态正常，无杂菌、无异常菌丝。（30分）
（4）测量相关数据（pH、总酸）完整、准确。（30分）
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
