谷氨酸菌种的扩大培养流程详解

以谷氨酸发酵的菌种扩大培养为例，其工艺流程如下：

（一）斜面菌种的培养

谷氨酸生产菌适用于糖质原料，需氧，以生物素为生长因子。菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸，并要求斜面菌种绝对纯，不得混有任何杂菌和噬菌体。

1. 斜面培养基组成

斜面培养基组成：葡萄糖0.1%，蛋白胨1.0%，牛肉膏1.0%，氯化钠0.5%，琼脂2.0%～2.5%，pH 7.0～7.2（传代和保藏斜面不加葡萄糖）。

2. 培养条件

斜面培养条件：33～34℃，培养18～24h。

（二）一级种子培养

一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培养条件从有利于长菌考虑。

1. 种子培养基组成

一级种子培养基组成：葡萄糖2.5%，尿素0.5%，硫酸镁0.04%，磷酸氢二钾0.1%，玉米浆2.5%～3.5%（按质增减），硫酸亚铁0.02%，硫酸锰0.02%，pH7.0。

2. 种子培养条件

一级种子培养条件：用1000mL三角瓶装入培养基200mL，灭菌后置于冲程7.6cm、频率96次/min的往复式摇床上振荡培养12h，培养温度33～34℃。

3. 一级种子质量要求(www.xing528.com)

一级种子质量要求：种龄12h，pH 6.4 ± 0.1；光密度：净增OD值0.5以上，残糖0.5%以下。无菌检查（-）；噬菌体检查（-）。镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐。革兰染色阳性。

（三）二级种子培养

为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在一级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养。

1. 种子培养基组成

二级种子培养培养基组成：几种常用谷氨酸菌株的二级种子培养基配比如表6-5所示，种子培养基成分接近发酵培养基，但在含量上，特别是水解糖和玉米浆的含量有很大差异，具体如表6-6所示。

表6-5 不同谷氨酸发酵菌株的二级种子培养基配比

表6-6 种子培养基和发酵培养基的差异

续表

2. 种子培养条件

二级种子培养条件：接种量0.8%～1.0%；培养温度32～34℃；培养时间7～9h。通风比（1/min）：50L种子罐1∶0.5，搅拌转速340r/min；250L种子罐1∶0.3，搅拌转速300r/min；500L种子罐1∶0.25，搅拌转速230r/min。

3. 种子质量要求

二级种子质量要求：种龄7～8h；pH 7.2左右。光密度：OD值净增0.5左右。残糖10～15g/L。无菌检查（-）；噬菌体检查（-）。镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐。革兰氏染色阳性。

二级种子培养过程中，pH变化有一定规律，pH从6.8上升到8.0左右，然后逐步下降。二级种子培养结束时，无杂菌或噬菌体污染，菌体大小均一，呈单个或八字排列，活菌数为10⁸～10⁹个/mL，活力旺盛处于对数生长期。