发酵生产中的接种包括两个方面:从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器中接种至种子罐;种子罐之间的移种及从种子罐移入生产发酵罐中。
摇瓶菌丝体可在火焰保护下接入种子罐或采用压差法接入。种子罐之间或发酵罐间的移种方式,主要采用压差法,由接种管道进行移种,移种过程中要防止接入罐的表压降到零,否则会染菌。
(一)火焰封口接种
主要采用酒精火焰在接种口形成火圈保护而进行接种。
接种前应事先准备好酒精棉、钳子、镊子、接种环、石棉网手套、Z字扳手等用具。菌种装入三角烧瓶内,接种量根据工艺要求确定。
将酒精棉花围在接种环周围点燃,将菌种瓶口在火焰上烧一下,用Z字扳手拧开接种口,迅速将菌种倒入罐内,此时应向罐内通气,使接种口有空气排出(压力接近于零,但不能为零)。将接种口螺母在火焰上灭菌后拧紧,并用酒精棉将接种口擦洗干净。(www.xing528.com)
接种后,调节进气阀,达到工艺要求的通风量及罐压。
(二)压差移种
接种瓶上装有橡皮管,在火封下与罐的接种口相连接,要求瓶与橡皮管的连接不漏,橡皮管与接种口大小一致。接种时,开大种子罐排气阀门,降低罐压同时拿掉接种叉,开大接种阀门,利用两者的压力差使种子进入种子罐内,完成接种。
生产上种子罐培养的种子液通常采用压差法通过专门的移种管道移入发酵罐,如图6-8所示。基本方法:分批发酵的发酵器分别用J和G进入蒸汽灭菌,同时打开D、I、A、B、H、E和F阀,使冷凝水能通过汽水分离器排出。经过20min后关闭J、G阀,停止供应蒸汽,并关闭I、H阀,而F、E、D阀仍开着,使连接管道内充满已灭菌的培养基。在发酵器内通过空气分布管通入无菌空气,当冷却至适当温度时,升高种子罐内的压力到0.08MPa,而发酵器的压力降至0.03MPa。打开C阀,培养物即被压入发酵器内,接种后将连接管道灭菌即可。
图6-8 从生产种子罐移种至发酵罐示意图
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