发酵工业培养基优化技巧

一、任务目标

（1）熟悉正交实验方案设计及优化发酵培养基的方法。

（2）掌握发酵液菌体浓度的测定方法。

二、操作原理

采用摇瓶、玻璃瓶等小型仪器，对碳、氮、无机盐和前体等进行酵母菌发酵的单因素实验，本实验在单因素实验的基础上，采用四因素三水平 [L₉（3⁴）]进行正交实验设计。通过正交设计及实验减少实验次数，确定培养基组分浓度和影响情况，从而优化酵母菌发酵培养基。

酵母生物量采用比浊法借助分光光度计测定细胞悬液的光密度表示。

三、材料器具

1. 实验材料及药品

酵母，葡萄糖，蔗糖，酵母膏，KH₂PO₄。

2. 主要仪器设备

恒温振荡培养箱，分光光度计，恒温水浴锅，电子天平，电炉。

四、任务实施

1. 实验方案设计

根据培养基配方，设计实验因素和水平（表3-17），设计正交表（表3-18）。

表3-17 实验因素与水平 单位：%(www.xing528.com)

表3-18 正交实验表

2. 培养基配制

如表3-18所示配制9组培养基于250mL锥形瓶中，每瓶60mL，于121℃下灭菌30min，冷却。

3. 接种培养

冷却后接种（接种量为5%），置于振荡培养箱培养（30℃，180r/min）。

五、结果分析

将不同时间的培养液摇均匀后于560nm波长、1cm比色皿中测定OD值，用未接种的培养基作空白对照，并将OD值填入表中，最终确定最佳培养基的组成及培养时间。

六、考核内容与评分标准

（1）正交实验方案设计。（20分）

（2）液体培养基的配制。（30分）

（3）接种、摇床培养操作。（30分）

（4）菌体浓度的比浊法测定。（20分）

项目拓展（三）