用高效液相色谱法测定调味品和腌制品中的中山梨酸和苯甲酸

1.原理

试样加热除去二氧化碳和乙醇，调pH值至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

2.仪器与试剂

（1）仪器 高效液相色谱仪（带紫外检测器）。

（2）试剂 所用试剂除另有规定外均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度的水，溶液为水溶液。甲醇经0.5μm滤膜过滤、（1+1）稀氨水（氨水加水等体积混合）、0.02mol/L乙酸铵溶液（称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45um滤膜过滤）、20g/L碳酸氢钠溶液[称取2g碳酸氢钠（优级纯），加水至100mL，振摇溶解]。其他试剂如下：

1）苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

2）山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液（20g/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。

3）苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/mL，经0.45μm滤膜过滤。

3.操作步骤

（1）试样的处理 称取10.0g试样，放入小烧杯中，用水浴加热除去乙醇，用（1+1）氨水调pH值约为7，加水定容至适当体积，经0.45μm滤膜过滤。

（2）高效液相色谱参考条件

1）柱：YWG—C₁₈ 4.6mm×250mm，10μm不锈钢柱。

2）流动相：（5+95）甲醇-乙酸铵溶液（0.02mol/L）。

3）流速：1mL/min。

4）进样量：10μL。

5）检测器：紫外检测器，波长为230nm，0.2AUFS。

根据保留时间定性，用外标峰面积法定量。

4.结果计算(www.xing528.com)

试样中苯甲酸或山梨酸的含量按式（3-2-50）进行计算。

式中 X——试样中山梨酸或苯甲酸的含量（g/kg）；

A——进样溶液中山梨酸或苯甲酸的质量（mg）；

V₁——进样体积（mL）；

V₂——试样稀释液总体积（μL）；

m——试样的质量（g）。

计算结果保留两位有效数字。

5.精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

式中 X——试样中山梨酸或苯甲酸的含量（g/kg）；

A——进样溶液中山梨酸或苯甲酸的质量（mg）；

V₁——进样体积（mL）；

V₂——试样稀释液总体积（μL）；

m——试样的质量（g）。

计算结果保留两位有效数字。

5.精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。