1.原理
水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用薄层色谱法分离，与标准比较定性、定量。
2.仪器与试剂
（1）仪器 可见分光光度计、微量注射器或血色素吸管、展开槽（25cm×6cm×4cm）、层析缸、滤纸（中速滤纸，纸色谱用）、薄层板（5cm×20cm）、电吹风机、水泵。
（2）试剂 石油醚（沸程为60～90℃）、甲醇、聚酰胺粉（200目）、硅胶G、（1+10）硫酸溶液、（6+4）甲醇-甲酸溶液、氢氧化钠溶液（50g/L），乙醇（体积分数为50%）、乙醇-氨溶液（取1mL氨溶液，加体积分数为70%的乙醇至100mL）、pH=6的水（在水中加200g/L柠檬酸溶液调pH值到6）、（1+10）盐酸溶液、柠檬酸溶液（200g/L）、钨酸钠溶液（100g/L）。其他试剂如下：
1）展开剂
①（6+2+3）正丁醇-无水乙醇-氨水（1%）：供纸色谱用。
②（6+3+4）正丁醇-吡啶-氨水（1%）：供纸色谱用。
③（7+3+3）甲乙酮-丙酮-水：供纸色谱用。
④（10+3+2）甲醇-乙二胺-氨水：供薄层色谱用。
⑤（5+1+10）甲醇-氨水-乙醇：供薄层色谱用。
⑥（8+1+2）柠檬酸钠溶液（25g/L）-氨水-乙醇：供薄层色谱用。
2）海砂：先用（1+10）盐酸溶液煮沸15min，用水洗至中性，再用氢氧化钠溶液（50g/L）煮沸15min，用水洗至中性，再于105℃干燥，储于具玻璃塞的瓶中，备用。
3）1.00mg/mL合成着色剂标准溶液：准确称取按纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g，置于100mL容量瓶中，加pH=6水至刻度。
4）0.1mg/mL着色剂标准使用液：临用时吸取5.0mL合成着色剂标准溶液置于50mL容量瓶，加pH=6的水稀释至刻度。
3.样品的处理
称取10.00g粉碎均匀的试样，放入100mL烧杯中，加少量海砂，拌匀，用热风吹干（用手摸已干燥即可），加30mL石油醚搅拌，放置片刻，倾出石油醚，如此处理三次，以除去脂肪。吹干后研细，全部倒入漏斗中，用乙醇-氨溶液提取着色剂。将着色剂完全提出后，再置于水浴上浓缩至约20mL，立即用（1+10）硫酸溶液调至微酸性，再加1mL（1+10）硫酸溶液，加1mL钨酸钠溶液（100g/L），使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液。
4.吸附分离
将处理所得的溶液加热至70℃，加入0.5～1.0g聚酰胺粉，充分搅拌，用柠檬酸溶液（200g/L）调至pH=4左右，使着色剂完全被吸附（如果溶液还有颜色，则再多加一些聚酰胺粉）。将混合物过滤（可以抽滤），用pH=4、70℃的水反复洗涤聚酰胺粉，每次20mL，边洗边搅。若含有天然着色剂，则再用甲醇-甲酸溶液洗1～3次，每次20mL，洗至滤液无色为止，再用70℃的水反复洗涤至流出的溶液为中性。洗涤过程中要搅拌。
用乙醇-氨溶液分数次解吸着色剂，收集全部解吸液，置于水浴上去除氨。如果样品中只有一种着色剂，则用水稀释至50mL，用分光光度计测定。如果为多种混合着色剂，则把除去氨的解吸液置于水浴上浓缩至约2mL，转移至5mL容量瓶，用体积分数为50%的乙醇洗涤容器，将洗液并入容量瓶，定容，用薄层色谱法测定。
5.定性
（1）薄层板的制备 称取1.6g聚酰胺粉、0.4g可溶性淀粉、2g硅胶G，置于研钵中，加15mL水研磨均匀后，立即置于涂布器中，铺成0.3mm的板，在室温下晾干，于80℃干燥1h，置于干燥器中备用。
（2）点样 在离底边2cm处，将0.5mL样液从左至右点成与底边平行的条状，板的左边点2μL着色剂标准使用液。(www.xing528.com)
（3）展开 取适量展开剂（苋菜红、胭脂红用展开剂④，亮蓝、靛蓝用展开剂⑤，柠檬黄与其他着色剂用展开剂⑥）置于层析缸中，将薄层板放入展开，待着色剂明显分开后取出，晾干，与标准斑比较定性。
6.定量
（1）绘制标准曲线 分别吸取0.0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红标准使用溶液，或者0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL亮蓝、靛蓝标准使用溶液，分别置于10mL比色管中，各加水至刻度。
用1cm比色杯，以零管调零，在一定波长下测定吸光度值，绘制标准曲线。
各种着色剂的最大吸收波长：柠檬黄为430nm，日落黄为482nm，苋菜红为520nm，胭脂红为510nm，亮蓝为627nm，靛蓝为620nm。
（2）试样的测定 用刀将薄层色谱板的条状色斑分别刮下，移入漏斗中，用乙醇-氨溶液解吸着色剂，少量反复多次，将解洗液并于蒸发皿中，在水浴上挥去氨，移入10mL比色管，并加水至刻度，做比色用。
用同样的条件测定试样溶液的吸光度，与标准系列溶液对照定量。
7.结果计算
试样中着色剂的含量按照式（3-2-46）计算。
式中 X——样品中着色剂的含量（g/kg）；
A——测定用样品液中着色剂的质量（mg）；
V1——试样解析后的总体积（mL）；
V2——测定时点样用的体积（mL）；
m——样品的质量（g）。
计算结果保留两位有效数字。
式中 X——样品中着色剂的含量（g/kg）；
A——测定用样品液中着色剂的质量（mg）；
V1——试样解析后的总体积（mL）；
V2——测定时点样用的体积（mL）；
m——样品的质量（g）。
计算结果保留两位有效数字。
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