如何测试肉蛋制品中的亚硝酸盐？

1.原理

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和净化，以氢氧化钾溶液为淋洗液，用阴离子交换柱分离，用电导检测器检测，以保留时间定性，用外标法定量。

2.仪器与试剂

（1）仪器 所有玻璃器皿使用前均需依次用2mol/L氢氧化钾和水分别浸泡4h，然后用水冲洗3～5次，晾干备用。

离子色谱仪（包括电导检测器，配有抑制器、高容量阴离子交换柱、50μL定量环）、食物粉碎机、超声波清洗器、天平（感量为0.1mg和1mg）、离心机（转速大于或等于10000r/min，配5mL或10mL离心管）、0.22μm水性滤膜针头滤器、净化柱（包括C₁₈柱、Ag柱和Na柱或等效柱）、注射器（1.0mL和2.5mL）。

（2）试剂 超纯水（电阻率大于18.2MΩ·cm）、乙酸（分析纯）、氢氧化钾（分析纯）、3%乙酸溶液（量取乙酸3mL置于100mL容量瓶中，以水稀释至刻度，混匀）、亚硝酸根离子（NO₂^-）标准溶液（100mg/L，水基体）、硝酸根离子（NO₃^-）标准溶液（1000mg/L，水基体）、亚硝酸盐（以NO₂^-计，下同）和硝酸盐（以NO₃^-计，下同）混合标准使用液（准确移取亚硝酸根离子和硝酸根离子的标准溶液各1.0mL，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶液每1L含亚硝酸根离子1.0mg和硝酸根离子10.0mg）。

3.试样预处理

用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用。

4.提取

1）鱼类、肉类、蛋类及其制品等：称取试样匀浆5g（精确至0.01g，可适当调整试样的取样量，以下相同），用80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每隔5min振摇一次，保持固相完全分散，然后于75℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度，溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000r/min离心15min，上清液备用。

2）腌鱼类、腌肉类及其他腌制品：称取试样匀浆2g（精确至0.01g），用80mL水洗入100mL容量瓶中，超声提取30min，每5min振摇一次，保持固相完全分散，然后于75℃水浴中放置5min，取出放置至室温，加水稀释至刻度，溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10000r/min离心15min，取上清液备用。

3）取上述备用的上清液约15mL，通过0.22μm水性滤膜针头滤器、C₁₈柱，弃去前面3mL（如果氯离子含量大于100mg/L，则需要依次通过针头滤器、C₁₈柱、Ag柱和Na柱，弃去前面7mL），收集后面的洗脱液待测。固相萃取柱使用前需进行活化。

5.参考色谱条件

（1）色谱柱 氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱，如Di_- onexIonPacAS11-HC4mm×250mm（带IonPacAG11-HC型保护柱4mm×50mm），或性能相当的离子色谱柱。

（2）淋洗液 氢氧化钾溶液，浓度为6～70mmol/L；洗脱梯度为6mmol/L30min，70mmol/L5min，6mmol/L5min；流速为1.0mL/min。

（3）抑制器 连续自动再生膜阴离子抑制器或等效抑制装置。

（4）检测器 电导检测器，检测池温度为35℃。

（5）进样体积 50μL（可根据试样中被测离子含量进行调整）。

6.测定

（1）标准曲线的绘制 移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液，加水稀释，制成亚硝酸根离子的质量浓度为0.00mg/L、0.02mg/L、0.04mg/L、0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.15mg/L、0.20mg/L，硝酸根离子的质量浓度为0.0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L的混合标准系列溶液，按质量浓度从低到高依次进样，以亚硝酸根离子或硝酸根离子的质量浓度（mg/L）为横坐标，以峰高（μS）或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或计算线性回归方程。

（2）样品的测定 分别吸取空白溶液和试样溶液50μL，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据保留时间定性，分别测量空白溶液和样品溶液的峰高（μS）或峰面积。(www.xing528.com)

7.结果计算

试样中亚硝酸盐（以NO₂^-计）或硝酸盐（以NO₃^-计）的含量按式（3-2-45）计算。

式中 x——试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量（mg/kg）；

c——测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子的质量浓度（mg/L）；

c₀——试剂空白溶液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的质量浓度（mg/L）；

V——试样溶液的体积（mL）；

f——试样溶液的稀释倍数；

m——试样取样量（g）。

结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的10%。

8.注意事项

试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5，即得亚硝酸盐（按亚硝酸钠计）含量；试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37，即得硝酸盐（按硝酸钠计）含量。

式中 x——试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量（mg/kg）；

c——测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子的质量浓度（mg/L）；

c₀——试剂空白溶液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的质量浓度（mg/L）；

V——试样溶液的体积（mL）；

f——试样溶液的稀释倍数；

m——试样取样量（g）。

结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的10%。

8.注意事项

试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以换算系数1.5，即得亚硝酸盐（按亚硝酸钠计）含量；试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数1.37，即得硝酸盐（按硝酸钠计）含量。