如何检测罐头中的合成着色剂？

1.原理

高效液相色谱法：水果罐头中的人工合成着色剂用乙醇-氨水提取，利用固相萃取柱净化，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器测定，用外标法定量。

2.仪器与试剂

（1）仪器 高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）、分析天平（感量为0.1mg）、匀浆机、快速混匀器、离心机（转速为3000r/min）、恒温水浴、0.45μm水性样品过滤器、固相萃取装置。

液相色谱条件如下：

1）色谱柱：Diamonsil C₁₈，5μm，4.6mm×250mm。

2）流动相：甲醇-乙酸铵溶液（0.02mol/L）。

3）梯度洗脱：梯度洗脱条件见表3-2-16。

表3-2-16 液相色谱梯度洗脱条件

（2）试剂 水（去离子水或相当纯度的水）、甲醛（色谱纯）、无水乙醇（分析纯）、氨水（分析纯）、盐酸（分析纯）。其他试剂如下：

1）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解，定容至1000mL，经0.45μm过滤器过滤。

2）无水乙醇-氨水溶液：量取无水乙醇80mL，氨水1mL，加水定容至100mL，混匀。

3）pH=8的50%甲醇溶液：量取甲醇50mL，加水定容至100mL，混匀，加氨水调pH值到8。

4）pH=8的水：水加氨水调pH值到8。

5）2%氨水：量取氨水2mL，加水定容至100mL，混匀。

6）（1+9）盐酸-乙醇溶液：量取10mL盐酸和90mL乙醇，混匀。

7）50%甲醇溶液：量取甲醇50mL，加水定容至100mL，混匀。

8）固相萃取柱或相当者：Sep-PakPlusQMA360mg，颗粒度为37～55μm，临用前依次加5mL甲醇（色谱纯）和5mL水预处理，保持柱体湿润。

9）合成着色剂标准储备液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红各0.0500g，置于100mL容量瓶中加水至刻度，配制成500μg/mL标准储备液。(www.xing528.com)

10）合成着色剂标准使用液：临用前将标准储备液加水稀释成20μm/mL的标准中间液，再将该中间液稀释成0.100μm/mL、0.200μm/mL、0.400μm/mL、1.00μm/mL、3.00μm/mL、5.00μm/mL的标准系列溶液，经0.45μm过滤器过滤。

3.检验程序和分析步骤

（1）样品的制备

1）提取：将整份试样用匀浆机打碎，再搅拌均匀，准确称取2.00g左右的样品（精确至0.01g），装入离心管中，加10mL无水乙醇-氨水溶液，涡旋0.5min，再以3000r/min的转速离心10min，将上清液倒入塞有脱脂棉的玻璃漏斗中过滤，将剩余残渣再重复操作三次，将收集的滤液（约40mL）置于80℃水浴中浓缩至约2mL，作为试样溶液。

2）净化：将浓缩后的试样溶液用2%的氨水调至pH=8后，转移到预处理过的固相萃取柱中，依次用3mLpH=8的水和pH=8的50%甲醇以小于2mL/min的流速清洗，弃去全部流出液，再用10mL（1+9）盐酸-乙醇溶液将着色剂洗脱出固相萃取柱，收集洗脱液，用氨水中和，于80℃的水浴中浓缩至尽干，冷却后用50%的甲醇溶液溶解并定容至10mL，经0.45μm滤膜过滤后，进行高效液相色谱测定。

（2）测定

1）进样量：10μL。

2）检测器：二极管阵列检测器选择柠檬黄428nm、苋菜红521nm、靛蓝608nm、胭脂红509nm、日落黄483nm、诱惑红507nm、亮蓝625nm、赤藓红529nm波长测定。

3）测定：根据保留时间定性，以外表峰面积法定量。

4.结果计算

式中 X——试样中被测组分的含量（mg/kg）；

c——由标准曲线得到的试样溶液中被测组分的含量（μg/mL）；

V——试样溶液定容体积（mL）；

m——试样质量（g）。

计算结果保留三位有效数字。

5.精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。