如何检验婴幼儿配方乳粉中的阪崎肠杆菌？

1.原理

利用阪崎肠杆菌的生化特性，将样品在阪崎肠杆菌显色培养基上进行培养，根据菌落特征，挑取疑似菌落进行鉴定，利用最大可能数法对样品中的阪崎肠杆菌进行计数。

2.仪器与试剂

（1）仪器 恒温培养箱（25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃）、冰箱（2～5℃）、恒温水浴箱（44℃±0.5℃）、天平（感量为0.1g）、均质器、振荡器、无菌吸管（1mL，具0.01mL刻度；10mL，分度值为0.1mL；或微量移液器及吸头）、无菌锥形瓶（容量为100mL、200mL、2000mL）、无菌培养皿（直径为90mm）、pH计或pH比色管或精密pH试纸、全自动微生物生化鉴定系统。

（2）试剂 缓冲蛋白胨水（BPW）、改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-Vm）、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）、L-赖氨酸脱羧酶培养基、L-鸟氨酸脱羧酶培养基、L-精氨酸双水解酶培养基、糖类发酵培养基、西蒙氏柠檬酸盐培养基，均按GB 4789.40—2010配制。

3.定性检验

阪崎肠杆菌定性检验程序见图3-2-8。

（1）前增菌和增菌 取检样100g加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，于36℃±1℃培养18h±2h，从中移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤中，于44℃±0.5℃培养24h±2h。

（2）分离 轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，于36℃±1℃培养24h±2h。挑取1～5个可疑菌落，划线接种于TSA平板，于25℃±1℃培养48h±4h。

（3）鉴定 自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表3-2-7。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。

图3-2-8 阪崎肠杆菌定性检验程序(www.xing528.com)

表3-2-7 阪崎肠杆菌的主要生化特征

注：+表示＞99%阳性；-表示＞99%阴性；（+）表示90%～99%阳性；（-）表示90%～99%阴性。

4.报告

综合菌落形态和生化特征，报告每100g样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。

5.计数

（1）操作步骤

1）样品的稀释：无菌称取样品100g、10g、1g，对应加入已预热至44℃分别盛有900mL、90mL、9mL的BPW中，轻轻振摇使充分溶解，制成1∶10样品匀液，置于36℃±1℃培养18h±2h，分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，于44℃±0.5℃培养24h±2h。

2）分离、鉴定：同阪崎肠杆菌定性检验。

（2）报告 综合菌落形态、生化特征，根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数，查MPN检索表（GB 4789.40—2010中的附录B），报告每100g样品中阪崎肠杆菌的MPN值。