1.高效液相色谱法
（1）原理 饮料中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性，与峰面积比较定量。
（2）仪器与试剂
1）仪器：高效液相色谱仪（带紫外检测器，254nm波长）。
2）试剂
①正己烷、盐酸、乙酸、甲醇（经0.5μm滤膜过滤）、聚酰胺粉（过200目筛）、饱和硫酸钠溶液、2g/L硫酸钠溶液、pH=6的水（水用柠檬酸溶液调至pH=6）。
②0.02mol/L乙酸铵溶液：移取1.54g乙酸铵，加水至1000mL溶解，经0.45μm滤膜过滤。
③氨水：取2mL氨水，加水至100mL，混匀。
④0.02mol/L氨水-乙酸铵溶液：取0.5mL氨水，加0.02mol/L乙酸铵溶液至1000mL，混匀。
⑤（6+4）甲醇-甲酸溶液：取60mL甲醇与40mL甲酸混匀。
⑥2g/L柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸（C6H8O7·H2O），加水至100mL溶解，混匀。
⑦（7+2+1）无水乙醇-氨水-水溶液：取70mL无水乙醇、20mL氨水、10mL水，混匀。
⑧5%三正辛胺正丁醇溶液：取5mL三正辛胺，加正丁醇至100mL，混匀。
⑨1.00mg/mL人工合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g，置于100mL容量瓶中，加pH值为6的水至刻度，摇匀。
⑩50.0μg/mL合成着色剂标准使用液：临用时将上述溶液加水稀释20倍，经0.45μm滤膜过滤。
（3）操作步骤
1）样品的制备：称取20.0～40.0g饮料放入100mL烧杯中，含二氧化碳的样品应先加热驱除二氧化碳，含酒精的饮料应加数片小碎磁片，加热驱除乙醇。
2）着色剂的提取
①聚酰胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调pH值至6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃且pH=4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3～5次（含赤藓红的样品用液-液分配法处理），再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL，经0.45μm滤膜过滤，取10μL进高效液相色谱仪。
②液-液分配法（适用于含赤藓红的样品）：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、10～20mL5%三正辛胺正丁醇溶液，振摇提取，分取有机相，重复提取，直到有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗两次，每次10mL，分取有机相置于蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混匀，加氨水提取2次或3次，每次5mL，合并氨水溶液层（含水溶性酸性着色剂），用正己烷洗2次，将氨水层加乙酸调成中性，用水浴加热蒸发近干，加水定容至5mL，经0.45μm滤膜过滤，取10μL进高效液相色谱仪。
3）高效液相色谱参考条件
①柱：YWG-C1810μm不锈钢柱，尺寸为ϕ4.6mm（内径）×250mm。
②流动相：甲醇-0.02mol/L乙酸铵溶液（pH=4）。
③梯度洗脱：甲醇，在20%～35%范围内，洗脱速率为3%/min；在35%～98%范围内，洗脱速率为9%/min；含量到达98%后继续洗脱6min。
④流速：1mL/min。(www.xing528.com)
⑤带紫外检测器，254nm波长。
4）测定：取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，用外标峰面积法定量。
（4）结果计算
式中 X——样品中合成着色剂的含量（g/kg）；
A——样液中合成着色剂的质量（μg）；
V2——进样体积（mL）；
V1——样品稀释总体积（mL）；
m——样品质量（g）。
计算结果保留两位有效数字。
（5）精密度 在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
2.薄层色谱法
水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离，与标准比较定性、定量。
若样品中有几种人工合成着色剂混合使用，结果表示应根据食品添加剂卫生标准（GB2760—2011）中规定的最大使用量按比例折算，以某一着色计。
式中 X——样品中合成着色剂的含量（g/kg）；
A——样液中合成着色剂的质量（μg）；
V2——进样体积（mL）；
V1——样品稀释总体积（mL）；
m——样品质量（g）。
计算结果保留两位有效数字。
（5）精密度 在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
2.薄层色谱法
水溶性酸性合成着色剂在酸性条件下被聚酰胺吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱法或薄层色谱法进行分离，与标准比较定性、定量。
若样品中有几种人工合成着色剂混合使用，结果表示应根据食品添加剂卫生标准（GB2760—2011）中规定的最大使用量按比例折算，以某一着色计。
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