全脂乳粉中亚硝酸盐的测定技能训练

1.原理

用分光光度法测定全脂乳粉中亚硝酸盐的含量。对试样进行沉淀蛋白质和除去脂肪处理后，在滤液中加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在538nm波长下测其吸光度，将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较，就可计算出样品中亚硝酸盐的含量。

2.仪器与试剂

（1）仪器 分析天平（感量为1mg）、烧杯（100mL）、容量瓶、移液管、比色管、量筒、定性滤纸（直径约为18cm）分光光度计（测定波长为538nm，使用1～2cm光程的比色皿）。

（2）试剂

1）沉淀蛋白和脂肪的溶液：硫酸锌溶液、亚铁氰化钾溶液。

2）显色液1：体积比为450∶550的盐酸。

3）显色液2：5g/L的磺胺溶液。

4）显色液3：1g/L的萘胺盐酸盐溶液。

5）亚硝酸钠标准溶液：相当于亚硝酸根的质量浓度为0.001g/L。

3.操作步骤

1）在100mL烧杯中准确称取10g（精确至0.001g）样品，用112mL55℃的水将样品洗入500mL锥形瓶中，混匀。

2）按顺序加入24mL硫酸锌溶液、24mL亚铁氰化钾溶液和40mL缓冲溶液，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充分摇匀。静置15min～1h，然后用滤纸过滤，滤液用250mL锥形瓶收集。

3）准确移取20mL滤液置于100mL容量瓶中，加水至约60mL，然后先加入6mL显色液1，边加边混，再加入5mL显色液2，小心混合溶液，使其在室温下静置5min，避免阳光直射，接着加入2mL显色液3，小心混合，使其在室温下静置5min，避免阳光直射，用水定容至刻度，混匀，在15min内用538nm波长，以空白试验液体为对照测定上述样品溶液的吸光度。

4）分别准确移取0mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL、12mL、16mL和20mL亚硝酸钠标准溶液置于9个100mL容量瓶中，在每个容量瓶中加水，使其体积约为60mL。加入2mL显色液3，小心混合，使其在室温下静置5min，用水定容至刻度，混匀。在15min内，用538nm波长，以第一个溶液（不含亚硝酸钠）为对照测定另外8个溶液的吸光度。

4.结果计算

（1）标准曲线的绘制 将测得的吸光度对亚硝酸根质量浓度作图。亚硝酸根的质量浓度可根据加入的亚硝酸钠标准溶液的量计算出来。亚硝酸根的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。亚硝酸根的质量浓度以_μg/100mL表示。

（2）结果计算

式中 X——样品中亚硝酸根的含量（mg/kg）；

c——根据样品管的吸光度，从标准曲线上读取的NO²-的质量浓度（μg/100mL）；(www.xing528.com)

m——样品的质量（g）；

V——所取滤液的体积（mL）。

样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐含量：

W（NaNO₂）=1.5W（NO₂^-） （2-3-28）

式中 W（NO₂^-）——样品中亚硝酸根的含量（mg/kg）；

W（NaNO₂）——样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐的含量（mg/kg）。

5.注意事项

样品液与标准溶液的显色顺序和时间要保持一致；显色时间不应过长，以免对测定结果造成影响；蛋白质沉淀剂也可选用乙酸锌溶液。

式中 X——样品中亚硝酸根的含量（mg/kg）；

c——根据样品管的吸光度，从标准曲线上读取的NO²-的质量浓度（μg/100mL）；

m——样品的质量（g）；

V——所取滤液的体积（mL）。

样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐含量：

W（NaNO₂）=1.5W（NO₂^-） （2-3-28）

式中 W（NO₂^-）——样品中亚硝酸根的含量（mg/kg）；

W（NaNO₂）——样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐的含量（mg/kg）。

5.注意事项

样品液与标准溶液的显色顺序和时间要保持一致；显色时间不应过长，以免对测定结果造成影响；蛋白质沉淀剂也可选用乙酸锌溶液。