如何测定婴幼儿配方乳粉中的不溶性膳食纤维？

1.原理

使用中性洗涤剂将试样中的糖、淀粉、蛋白质、果胶等物质溶解除去，不能溶解的残渣为不溶性膳食纤维，主要包括纤维素、半纤维素、木质素、角质和二氧化硅等，并包括不溶性灰分。

2.仪器与试剂

（1）仪器 分析天平（感量为0.1mg）、烘箱（110～130℃）、恒温箱（37℃±2℃）、纤维测定仪。若没有纤维测定仪，则可由以下部件组成：

1）电热板：带控温装置。

2）高型无嘴烧杯：600mL。

3）坩埚式耐酸玻璃滤器：容量为60mL，孔径为40～60μm。

4）回流冷凝装置。

5）抽滤装置：由抽滤瓶、抽滤垫及水泵组成。

6）pH计：精度为0.01。

（2）试剂

1）无水亚硫酸钠、石油醚（沸程30～60℃）、丙酮、甲苯、EDTA二钠盐、四硼酸钠（含10个结晶水）、月桂基硫酸钠、乙二醇独乙醚、无水磷酸氢二钠、磷酸、磷酸二氢钠、质量分数为2.5%的α-淀粉酶溶液、耐热玻璃棉（耐热130℃且不易折断）。

2）磷酸盐缓冲液：由38.7mL0.1mol/L磷酸氢二钠和61.3mL0.1mol/L磷酸二氢钠混合而成，pH=7.0±0.2。

3）中性洗涤液：将18.61gEDTA二钠盐和6.81g四硼酸钠（含10个结晶水）置于烧杯中，加水约100mL，加热使之溶解，将30.00g月桂基硫酸钠和10mL乙二醇独乙醚溶于约650mL热水中，合并上述两种溶液，再将4.56g无水磷酸氢二钠溶于130mL热水中，并入上述溶液中，用磷酸调节上述混合液至pH=6.9～7.1，最后加水至1000mL。

3.操作步骤

1）准确称取试样1.0g，置于高型无嘴烧杯中，用石油醚于30～60℃提取脂肪3次，每次10mL，然后加100mL中性洗涤剂溶液，再加0.5g无水亚硫酸钠，用电炉加热，在5～10min内使其煮沸，移至电热板上，保持微沸1h。

2）在耐酸玻璃滤器中，铺1～3g玻璃棉，移至烘箱内，于110℃烘4h，取出置于干燥器中冷至室温，准确称量（精确到0.0001g），记录为m₁。

3）将煮沸后的试样趁热倒入滤器中，用水泵抽滤，然后用500mL热水（90℃），分数次洗烧杯及滤器，抽滤至干。洗净滤器下部的液体和泡沫，塞上橡胶塞。

4）在滤器中加酶液，液面需覆盖纤维，然后用细针挤压掉其中的气泡，加数滴甲苯，盖上表面皿，置于37℃恒温箱中过夜。(www.xing528.com)

5）取出滤器，除去底部塞子，抽滤去酶液，并用300mL热水分数次洗去残留酶液，用碘液检查是否有淀粉残留。若有淀粉残留，则继续加酶水解；若淀粉已除尽，则抽干，再用丙酮洗2次。

6）将滤器置于烘箱中，于110℃烘4h，取出，置于干燥器中，冷至室温，准确称量（精确到0.0001g），记录为m₂。

4.结果计算

试样中不溶性膳食纤维的含量按式（2-3-26）计算。

式中 X——试样中不溶性膳食纤维的含量（g/100g）；

m₁——滤器加玻璃棉的质量（g）；

m₂——滤器加玻璃棉及试样中纤维的质量（g）；

m——试样质量（g）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

5.注意事项

注意严格控制洗涤和酶解条件。

式中 X——试样中不溶性膳食纤维的含量（g/100g）；

m₁——滤器加玻璃棉的质量（g）；

m₂——滤器加玻璃棉及试样中纤维的质量（g）；

m——试样质量（g）。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

5.注意事项

注意严格控制洗涤和酶解条件。