婴幼儿配方乳粉中脲酶测定技能训练

1.原理

脲酶在适当酸碱度和温度下，催化尿素转化成碳酸铵，而碳酸铵在碱性条件下形成氢氧化铵，与纳氏试剂中的碘化钾汞复盐作用形成棕色的碘化双汞铵。

2.仪器与试剂

（1）仪器 电子天平（感量为0.1g）、旋涡振荡器、恒温水浴锅（40℃±1℃）。

（2）试剂

1）10g/L尿素溶液、100g/L钨酸钠溶液、20g/L酒石酸钾钠溶液、体积分数为5%的硫酸。

2）中性缓冲溶液：取0.067mol/L磷酸氢二钠溶液611mL，加入389mL0.067mol/L磷酸二氢钾溶液混合均匀即可。

3）纳氏试剂：称取红色碘化汞55g，碘化钾41.25g，溶于250mL蒸馏水中，溶解后，倒入1000mL容量瓶中，再称取氢氧化钠144g溶于500mL水中，溶解并冷却后，再缓慢地倒入上述1000mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，倒入试剂瓶静止后，用上清液。

3.操作步骤

1）取甲、乙两支试管，各加入0.10g样品，再加入1mL蒸馏水，振摇0.5min（约100次），然后各加入1mL中性缓冲溶液。(www.xing528.com)

2）向甲管（样品管）加入1mL尿素溶液，再向乙管（空白对照管）加入1mL蒸馏水，两管摇匀后，置于40℃±1℃水浴中保温20min。

3）从水浴中取出两管后，各加4mL蒸馏水，摇匀，再加1mL钨酸钠溶液，摇匀，加1mL硫酸溶液，摇匀，过滤备用。

4）取上述滤液2mL，分别注入2支25mL具塞的比色管中，再各加入15mL水、1mL酒石酸钾钠溶液和2mL纳氏试剂，最后以蒸馏水定容至25mL，摇匀，5min内观察结果。

4.结果判定

结果判定见表2-3-15。

表2-3-15 婴幼儿配方乳粉中脲酶的测定结果判定

5.注意事项

试样和空白试验同时操作，过程要迅速，防止时间影响。