1.乙醚提取法
（1）原理 油脂与氢氧化钾-乙醇溶液在煮沸回流条件下进行皂化，用乙醚从皂化液中提取不皂化物，蒸发溶剂并将残留物干燥后称重。
（2）仪器与试剂
1）仪器：实验室常用仪器，特别是圆底烧瓶（带标准磨口的250mL圆底烧瓶）、回流冷凝管（具有与烧瓶配套的磨口）、500mL分液漏斗（使用聚四氟乙烯活塞和塞子）、水浴锅、电烘箱（温度可控制在103℃±2℃）。
2）试剂：乙醚（新蒸过，不含过氧化物和残留物）、丙酮、氢氧化钾-乙醇溶液[c（KOH）≈1mol/L，在50mL水中溶解60g氢氧化钾，然后用体积分数为95%的乙醇稀释至1000mL，溶液应为无色或浅黄色）、氢氧化钾水溶液[c（KOH）≈0.5mol/L]、酚酞指示剂（10g/L的体积分数为95%的乙醇溶液。
（3）操作步骤
1）试样的制备：所取样品应具有代表性，且在运输与储存过程中无损坏或变质现象。扦样方法推荐采用ISO 5555：2001规定的方法。按照GB/T 15687—2008制备试验样品。
2）试样：称取约5g试样，精确至0.01g，置于250mL烧瓶中。
3）皂化：加入50mL氢氧化钾-乙醇溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后，小心煮沸回流1h，停止加热，从回流管顶部加入100mL水并旋转摇动。
4）不皂化物的提取：冷却后转移皂化液到500mL分液漏斗中，用100mL乙醚分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗液倒入分液漏斗中，盖好塞子，倒转分液漏斗，用力摇1min，然后小心打开旋塞，间歇地释放内部压力，静置分层后，将下层皂化液尽量完全放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，则可加少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液进行破乳。
采用相同的方法，每次用100mL乙醚再提取皂化液两次，收集三次乙醚提取液，放入装有40mL水的分液漏斗中。
5）乙醚提取液的洗涤：轻轻转动装有提取液和40mL水的分液漏斗（不要剧烈地摇动，否则可能会形成乳化液），等待完全分层后弃去下面的水层，用40mL水再洗涤乙醚溶液两次，每次都要剧烈震摇，且在分层后弃去下面的水层。排出洗涤液时需留2mL，然后沿轴线旋转分液漏斗，等待几分钟，让保留的水层分离。弃去水层，当乙醚溶液到达旋塞口时关闭旋塞。用40mL氢氧化钾水溶液和40mL水相继洗涤乙醚溶液后，再用40mL氢氧化钾水溶液进行洗涤，然后用40mL水洗涤至少两次。继续用水洗涤，直到向洗涤液中加入1滴酚酞溶液后不再呈粉红色为止。
6）蒸发溶剂：通过分液漏斗的上口，小心地将乙醚溶液全部转移至250mL烧瓶（此烧瓶需预先于103℃±2℃的烘箱中干燥，冷却后称量，精确至0.1mg）中，然后在沸水浴上蒸馏并回收溶剂；加入5mL丙酮，在沸水浴上转动时倾斜握住烧瓶，在缓缓的空气流下，将挥发性溶剂完全蒸发。
7）残留物的干燥和测定：将烧瓶水平放置在温度为103℃±2℃的烘箱中，干燥15min，然后放在干燥器中冷却，取出称量，准确至0.1mg。按上述方法间隔15min重复干燥，直至两次称量质量相差不超过1.5mg。如果三次干燥后还不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。当需要对残留物中的游离脂肪酸进行校正时，将称量后的残留物溶于4mL乙醚中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示液呈淡粉色的乙醇中，用0.1mol/L标准氢氧化钾醇溶液滴定到相同的终点颜色，以油酸来计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。
8）测定次数及空白试验
①同一试样需进行两次测定。
②空白试验：用相同步骤及相同量的所有试剂，但不加试样进行空白试验。如果残留物超过1.5mg，则需对试剂和方法进行检查。
（4）结果计算 试样中的不皂化物含量按式（2-3-10）计算。
式中 X——试样中不皂化物的含量，以质量分数计；
m0——试样的质量（g）；
m1——残留物的质量（g）；
m2——空白试验的残留物质量（g）；
m3——游离脂肪酸的质量（g），如果需要，等于0.28Vc，其中V为滴定所用标准氢氧化钾-乙醇溶液的体积（mL），c为氢氧化钾-乙醇标准溶液的准确浓度（mol/L），0.28为每毫摩尔油酸的质量（g）。
用两次测定数据的算术平均值作为结果。
2.己烷提取法
（1）原理 油脂与氢氧化钾-乙醇溶液在煮沸回流条件下进行皂化，用己烷或石油醚从皂化液中提取不皂化物，蒸发溶剂并将残留物干燥后称重。
（2）仪器与试剂
1）仪器：实验室常用仪器，特别是圆底烧瓶（带标准磨口的250mL圆底烧瓶）、回流冷凝管（具有与烧瓶配套的磨口）、250mL分液漏斗（使用聚四氟乙烯活塞和塞子）、水浴锅、电烘箱（温度可控制在103℃±2℃；或者采用真空干燥箱，如旋转蒸发器或其他相似设备）。
2）试剂
①正己烷或沸点为40～60℃的石油醚：溴价低于1，且不得含有杂质。
②10%（体积分数）乙醇溶液。
③氢氧化钾-乙醇溶液[c（KOH）≈1mol/L]：在50mL水中溶解60g氢氧化钾，然后用95%（体积分数）乙醇稀释至1000mL，溶液应为无色或浅黄色。
④酚酞指示剂：10g/L的95%（体积分数）乙醇溶液。
（3）操作步骤
1）试样的制备：所取样品应具有代表性，且在运输与储存过程中无损坏或变质现象。扦样方法推荐采用ISO5555：2001规定的方法。按照GB/T 15687—2008制备试验样品。
2）试样：称取约5g试样，精确至0.01g，置于250mL烧瓶中。
3）皂化：加入50mL氢氧化钾-乙醇溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后，小心煮沸回流1h，停止加热，从回流管顶部加入50mL水并旋转摇动。
4）不皂化物的提取：冷却后转移皂化液到250mL分液漏斗中，用50mL己烷分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗液倒入分液漏斗中，盖好塞子，用力摇1min，倒转分液漏斗，小心打开旋塞，间歇地释放内部压力，静置分液漏斗至溶液分层后，尽量将下层皂化液完全放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，则可加少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液进行破乳。用相同的方法，每次用50mL己烷再提取皂化液两次，将三次己烷提取液收集在同一分液漏斗中。
5）己烷提取物的洗涤：用乙醇溶液洗涤提取液三次，每次用量25mL，并剧烈摇动，洗涤后弃去乙醇水溶液；每次弃去洗涤液后，保持分液漏斗中剩余2mL洗涤液，然后将分液漏斗沿其轴线旋转；静置数分钟，使剩余的乙醇水相进一步分离，然后将其弃去。当己烷溶液到达旋塞孔道时，关闭旋塞，继续用乙醇水溶液洗涤，直到加入1滴酚酞溶液后洗涤液不呈现粉红色为止。
6）蒸发溶剂：通过分液漏斗的上口小心地将己烷溶液转移到准确称量至0.1mg的250mL烧瓶（烧瓶需预先在103℃烘箱中干燥冷却后称量）中，然后在沸水浴中蒸发溶剂。
7）残留物的干燥和测定。
①将烧瓶水平放置在103℃烘箱中，干燥残留物15min，然后在干燥器中冷却，并精确称量至0.1mg。也可使用真空干燥器干燥，在最大真空度下，在沸水浴中蒸15min之后，冷却至室温，将烧瓶表面的水擦干，精确称量至0.1mg。重复进行干燥，直至两次称量的质量差不超过1.5mg。如果三次干燥后还不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。
②若需用游离脂肪酸进行校正，则将称量后的残留物溶于4mL正己烷中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示剂呈淡粉色的乙醇，用0.1mol/L标准氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至终点。以油酸计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。
8）测定次数及空白试验
①同一试样需进行两次测定。
②空白试验：用相同步骤及相同量的所有试剂，但不加试样进行空白试验。如果残留物超过1.5mg，则需对试剂和方法进行检查。
（4）结果计算 试样中不皂化物的含量按式（2-3-11）计算。(www.xing528.com)
式中 X——试样中不皂化物的含量，以质量分数计；
m0——试样的质量（g）；
m1——残留物的质量（g）；
m2——空白试验的残留物质量（g）；
m3——游离脂肪酸的质量（g），如果需要，等于0.28Vc，其中V为滴定所用标准氢氧化钾-乙醇溶液的体积（mL），c为氢氧化钾-乙醇标准溶液的准确浓度（mol/L），0.28为每毫摩尔油酸的质量（g）。
用两次测定数据的算术平均值作为结果。
2.己烷提取法
（1）原理 油脂与氢氧化钾-乙醇溶液在煮沸回流条件下进行皂化，用己烷或石油醚从皂化液中提取不皂化物，蒸发溶剂并将残留物干燥后称重。
（2）仪器与试剂
1）仪器：实验室常用仪器，特别是圆底烧瓶（带标准磨口的250mL圆底烧瓶）、回流冷凝管（具有与烧瓶配套的磨口）、250mL分液漏斗（使用聚四氟乙烯活塞和塞子）、水浴锅、电烘箱（温度可控制在103℃±2℃；或者采用真空干燥箱，如旋转蒸发器或其他相似设备）。
2）试剂
①正己烷或沸点为40～60℃的石油醚：溴价低于1，且不得含有杂质。
②10%（体积分数）乙醇溶液。
③氢氧化钾-乙醇溶液[c（KOH）≈1mol/L]：在50mL水中溶解60g氢氧化钾，然后用95%（体积分数）乙醇稀释至1000mL，溶液应为无色或浅黄色。
④酚酞指示剂：10g/L的95%（体积分数）乙醇溶液。
（3）操作步骤
1）试样的制备：所取样品应具有代表性，且在运输与储存过程中无损坏或变质现象。扦样方法推荐采用ISO5555：2001规定的方法。按照GB/T 15687—2008制备试验样品。
2）试样：称取约5g试样，精确至0.01g，置于250mL烧瓶中。
3）皂化：加入50mL氢氧化钾-乙醇溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后，小心煮沸回流1h，停止加热，从回流管顶部加入50mL水并旋转摇动。
4）不皂化物的提取：冷却后转移皂化液到250mL分液漏斗中，用50mL己烷分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗液倒入分液漏斗中，盖好塞子，用力摇1min，倒转分液漏斗，小心打开旋塞，间歇地释放内部压力，静置分液漏斗至溶液分层后，尽量将下层皂化液完全放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，则可加少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液进行破乳。用相同的方法，每次用50mL己烷再提取皂化液两次，将三次己烷提取液收集在同一分液漏斗中。
5）己烷提取物的洗涤：用乙醇溶液洗涤提取液三次，每次用量25mL，并剧烈摇动，洗涤后弃去乙醇水溶液；每次弃去洗涤液后，保持分液漏斗中剩余2mL洗涤液，然后将分液漏斗沿其轴线旋转；静置数分钟，使剩余的乙醇水相进一步分离，然后将其弃去。当己烷溶液到达旋塞孔道时，关闭旋塞，继续用乙醇水溶液洗涤，直到加入1滴酚酞溶液后洗涤液不呈现粉红色为止。
6）蒸发溶剂：通过分液漏斗的上口小心地将己烷溶液转移到准确称量至0.1mg的250mL烧瓶（烧瓶需预先在103℃烘箱中干燥冷却后称量）中，然后在沸水浴中蒸发溶剂。
7）残留物的干燥和测定。
①将烧瓶水平放置在103℃烘箱中，干燥残留物15min，然后在干燥器中冷却，并精确称量至0.1mg。也可使用真空干燥器干燥，在最大真空度下，在沸水浴中蒸15min之后，冷却至室温，将烧瓶表面的水擦干，精确称量至0.1mg。重复进行干燥，直至两次称量的质量差不超过1.5mg。如果三次干燥后还不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。
②若需用游离脂肪酸进行校正，则将称量后的残留物溶于4mL正己烷中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示剂呈淡粉色的乙醇，用0.1mol/L标准氢氧化钾-乙醇标准溶液滴定至终点。以油酸计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。
8）测定次数及空白试验
①同一试样需进行两次测定。
②空白试验：用相同步骤及相同量的所有试剂，但不加试样进行空白试验。如果残留物超过1.5mg，则需对试剂和方法进行检查。
（4）结果计算 试样中不皂化物的含量按式（2-3-11）计算。
式中 X——试样中不皂化物的含量，以质量分数计；
m0——试样的质量（g）；
m1——残留物的质量（g）；
m2——空白试验时的残留物质量（g）；
m3——游离脂肪酸的质量（g），如果需要，等于0.28Vc，其中V为滴定所用标准氢氧化钾-乙醇溶液的体积（mL），c为氢氧化钾-乙醇标准溶液的准确浓度（mol/L），0.28为每毫摩尔油酸的质量（g）。
用两次测定数据的算术平均值作为结果。
（5）注意事项 不皂化物通常是指试样用氢氧化钾皂化后的全部生成物用指定溶剂提取，在规定条件下蒸发溶剂，所余不挥发的所有物质。不皂化物的组成一般包括自然界中的脂类物质，如甾醇、烃类、醇类、脂肪族和萜烯醇类，以及用溶剂在103℃提取时不挥发的外来有机物（如矿物油）。通过对油脂中不皂化物含量的测定，可以鉴别油脂的纯度、有无掺杂作假。同时，油脂不皂化物的含量是制皂工业选取原料时的主要依据之一。
在我国现行的国际标准中，测定油脂不皂化物的方法有两种：乙醚提取法和己烷提取法。其中，乙醚提取法为主要方法。当气候条件或环境规定不允许使用乙醚时，可以使用己烷提取法。如果条件允许，尤其是当不皂化物需要进一步检测时，可使用真空旋转蒸发器。蒸发时尽量采用水浴等不见明火的热源。
式中 X——试样中不皂化物的含量，以质量分数计；
m0——试样的质量（g）；
m1——残留物的质量（g）；
m2——空白试验时的残留物质量（g）；
m3——游离脂肪酸的质量（g），如果需要，等于0.28Vc，其中V为滴定所用标准氢氧化钾-乙醇溶液的体积（mL），c为氢氧化钾-乙醇标准溶液的准确浓度（mol/L），0.28为每毫摩尔油酸的质量（g）。
用两次测定数据的算术平均值作为结果。
（5）注意事项 不皂化物通常是指试样用氢氧化钾皂化后的全部生成物用指定溶剂提取，在规定条件下蒸发溶剂，所余不挥发的所有物质。不皂化物的组成一般包括自然界中的脂类物质，如甾醇、烃类、醇类、脂肪族和萜烯醇类，以及用溶剂在103℃提取时不挥发的外来有机物（如矿物油）。通过对油脂中不皂化物含量的测定，可以鉴别油脂的纯度、有无掺杂作假。同时，油脂不皂化物的含量是制皂工业选取原料时的主要依据之一。
在我国现行的国际标准中，测定油脂不皂化物的方法有两种：乙醚提取法和己烷提取法。其中，乙醚提取法为主要方法。当气候条件或环境规定不允许使用乙醚时，可以使用己烷提取法。如果条件允许，尤其是当不皂化物需要进一步检测时，可使用真空旋转蒸发器。蒸发时尽量采用水浴等不见明火的热源。
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