1.原理
试样用沸腾的稀硫酸处理，残渣经过滤分离、洗涤，用沸腾的氢氧化钾溶液处理。处理后的残渣经过滤分离、洗涤、干燥并称量，然后灰化。灰化中损失的质量相当于试样中粗纤维的质量。
2.仪器与试剂
（1）仪器
1）实验室常用仪器。
2）粉碎设备：能将样品粉碎，使其全部通过孔径为1.0mm的筛。
3）分析天平：感量为0.1mg。
4）滤埚：石英、陶瓷或者硬质玻璃材质，带有烧结的滤板，孔径为40～100μm。在初次使用前，将新滤埚小心地逐步加热，温度不超过525℃，并在500℃±25℃下保持数分钟。也可以使用具有同样性能特性的不锈钢坩埚，其不锈钢滤板的孔径为90μm。
5）陶瓷筛板。
6）灰化皿。
7）烧杯或锥形瓶：容量为500mL，带有配套的冷却装置。
8）干燥箱：电加热，可通风，能将温度保持在130℃±2℃。
9）干燥器：盛有蓝色硅胶干燥剂，内有厚度为2～3mm的多孔板，最好为铝或不锈钢材质。
10）马弗炉：电加热，可通风，温度可以调控，在475～525℃条件下能够保持滤埚周围温度准确至±25℃。
11）冷提取装置：需带有滤埚支架，以及连接真空、液体排出孔的有旋塞排放管和连接滤埚的连接环等部件。
12）加热装置（适用于手工操作法）：带有冷却装置，以保证溶液沸腾时体积不发生变化。
13）加热装置（适用于半自动操作法）：用于酸碱消解，需包括滤埚支架，连接真空和液体排出孔的有旋塞排放管，容积至少为270mL的消解圆筒（供消解用，并带有回流冷凝器），以及连接加热装置、滤埚和消解圆筒的连接环。压缩空气可以选配。装置在使用前用沸水预热5min。
（2）试剂
1）盐酸溶液（0.5mol/L）、硫酸溶液（0.13mol/L±0.005mol/L）、氢氧化钾溶液（0.23mol/L±0.005mol/L）、丙酮、消泡剂（如正辛醇）、石油醚（沸程为30～60℃）。
2）过滤辅料：海砂或硅藻土，或质量相当的其他材料。使用前，海砂用沸腾的盐酸（4mol/L）溶液处理，用水洗涤至中性，然后在500℃±25℃下至少加热1h。其他滤器材料在500℃±25℃下至少加热4h。
3.操作步骤
（1）扦样 所取样品应具有代表性，且在运输与储存过程中无损坏或变质现象。扦样方法推荐采用ISO6497：2005规定的方法。
（2）样品的制备 按照GB/T20195—2006制备样品。用粉碎机将实验室风干的样品粉碎，使其能全部通过孔径为1.0mm的筛，然后将样品充分混合均匀。
（3）手工操作方法
1）试料：称取1g制备好的试样，准确至0.1mg（m1）。如果试样脂肪含量超过100g/kg，或试样中的脂肪不能用石油醚提取，则将试样转移至滤埚中，按下面的“2）预脱脂”步骤处理；如果试样脂肪含量不超过100g/kg，则将试样转移至烧杯中。如果其碳酸盐（以碳酸钙计）含量超过50g/kg，则按下面的“3）除去碳酸盐”步骤处理；如果其碳酸盐（以碳酸钙计）含量不超过50g/kg，则按下面的“4）酸消解”步骤进行操作。
2）预脱脂：在冷提取装置中，在真空条件下，试样用30mL石油醚脱脂后，抽吸干燥残渣，重复3次，将残渣转移至烧杯中。
3）除去碳酸盐：向样品中加入100mL盐酸，连续振摇5min，小心地将溶液倒入铺有过滤辅料的滤埚中，小心地用水洗涤2次，每次100mL，应充分洗涤，以使尽可能少的物质留在过滤辅料上。把滤埚中的物质转移至原来的烧杯中，按下面的“4）酸消解”步骤操作。
4）酸消解：向装有试样的烧杯中加入150mL硫酸溶液，尽快加热使其沸腾，并保持沸腾状态30min±1min。在开始沸腾时，缓慢转动烧杯，如果起泡，则加入数滴消泡剂。开启冷却装置，保持溶液体积不发生变化。
5）第一次过滤：在滤埚中铺一层过滤辅料（其厚度约为滤埚高度的1/5），在过滤辅料上可盖筛板以防其溅起，当酸消解结束时，把液体通过搅拌棒倾入滤埚内，用弱真空抽滤，使150mL酸消解液几乎全部通过。当在抽滤过程中，因堵塞而无法抽滤时，用搅拌棒小心地拨开覆盖在过滤辅料上的粗纤维。残渣用热水洗涤5次，每次用水约10mL。注意使滤埚的筛板始终有过滤辅料覆盖，以使粗纤维不接触筛板。停止抽气，加入一定体积的丙酮，使其刚好能覆盖残渣。静置数分钟后，慢慢抽滤去除丙酮，继续抽气，使空气通过残渣，使其干燥。如果试样中的脂肪不能直接用石油醚提取，则按照下面的“6）脱脂”步骤操作，反之则按照下面的“7）碱消解”步骤操作。
6）脱脂：在冷凝装置中，于真空条件下，用30mL石油醚对试样进行脱脂并抽吸干燥，重复3次。
7）碱消解：将残渣定量转移至酸消解用的同一烧杯中，加入150mL氢氧化钾溶液，尽快加热使其沸腾，并保持沸腾状态30min±1min。开启冷却装置，保持溶液体积不发生变化。
8）第二次过滤：在滤埚中铺一层过滤辅料（其厚度约为滤埚高度的1/5），过滤辅料上可盖筛板以防其溅起，将烧杯中的物质过滤到滤埚里，残渣用热水洗涤至中性。残渣在负压条件下用丙酮洗涤3次，每次用丙酮30mL，每次洗涤后继续抽气以干燥残渣。
9）干燥：将滤埚置于灰化皿中，在130℃的干燥箱中至少干燥2h。在加热或冷却的过程中，滤埚的烧结滤板可能会部分松散，导致分析结果错误，因此应将滤埚置于灰化皿中。滤埚和灰化皿在干燥器中冷却，从干燥器中取出后，立即对滤埚和灰化皿进行称量（m2），准确至0.1mg。
10）灰化：将滤埚和灰化皿放到马弗炉中，在500℃±25℃下灰化。每次灰化后，让滤埚和灰化皿在马弗炉中初步冷却，待温热时取出，置于干燥器中，使其完全冷却，再进行称量，直至冷却后两次的称量差值不超过2mg，将最后一次称量结果记为m3，准确至0.1mg。(www.xing528.com)
11）空白测定：用大约相同数量的滤器辅料按上述“酸消解”至“灰化”的步骤进行空白测定，但不加试样。灰化引起的质量损失不应超过2mg。
（4）半自动操作法
1）试料：称取1g制备好的试样，准确至0.1mg（m1），转移至带有约2g过滤辅料的滤埚中。如果试样脂肪含量超过100g/kg，或试样中的脂肪不能用石油醚提取，则将试样转移至滤埚中，按下面的“2）预脱脂”步骤处理；如果试样脂肪含量不超过100g/kg，则将试样转移至烧杯中。如果其碳酸盐（以碳酸钙计）含量超过50g/kg，则按下面的“3）除去碳酸盐”步骤处理；如果其碳酸盐（以碳酸钙计）含量不超过50g/kg，则按下面的“4）酸消解”步骤进行操作。
2）预脱脂：连接滤埚和冷提取装置，在真空条件下将试样用30mL石油醚脱脂后，抽吸干燥残渣，重复3次。如果其碳酸盐（以碳酸钙计）超过50g/kg，则按下面的“3）除去碳酸盐”步骤处理；如果其碳酸盐（以碳酸钙计）含量不超过50g/kg，则按下面的“4）酸消解”步骤进行操作。
3）除去碳酸盐：连接滤埚和加热装置，加入30mL盐酸，放置1min，洗涤过滤样品，重复3次，然后用约30mL的水洗涤一次，按下面的“4）酸消解”步骤操作。
4）酸消解：连接消解圆筒和滤埚，将150mL沸腾的硫酸加入带有滤埚的圆筒中（如果起泡，则加入数滴消泡剂），尽快加热至沸腾，并保持剧烈沸腾30min±1min。
5）第一次过滤：停止加热，打开排放管旋塞，在真空条件下，通过滤埚将硫酸滤出。残渣每次用30mL热水洗涤，至少洗涤3次，洗涤至中性，每次洗涤后应继续抽气，以干燥残渣。如果过滤器堵塞，则可小心地吹气以排除堵塞。如果试样中的脂肪不能直接用石油醚提取，则按照下面的“6）脱脂”步骤操作，反之则按照下面的“7）碱消解”步骤操作。
6）脱脂：连接滤埚和冷却装置，在真空条件下用丙酮洗涤残渣3次，每次用丙酮30mL，然后在真空条件下用石油醚洗涤残渣3次，每次用石油醚30mL，每次洗涤后均应继续抽气，以干燥残渣。
7）碱消解：关闭排出孔旋塞，将150mL沸腾的氢氧化钾溶液转移至带有滤埚的圆筒中，加入数滴消泡剂，尽快加热使其沸腾，并保持剧烈沸腾状态30min±1min。
8）第二次过滤：停止加热，打开排放管旋塞，在真空条件下通过滤埚将氢氧化钾溶液滤出，每次用30mL热水洗涤残渣至少3次，洗涤至中性，每次洗涤后继续抽气，以干燥残渣。如果过滤器堵塞，则可小心地吹气以排除堵塞。将滤埚连接到冷提取装置，在真空条件下用丙酮洗涤残渣3次，每次用丙酮30mL，每次洗涤后应继续抽气，以干燥残渣。
9）干燥：将滤埚置于灰化皿中，在130℃的干燥箱中至少干燥2h。在加热或冷却的过程中，滤埚的烧结滤板可能会部分松散，从而导致分析结果错误，因此应将滤埚置于灰化皿中。滤埚和灰化皿在干燥器中冷却，从干燥器中将其取出后，立即对滤埚和灰化皿进行称量（m2），准确至0.1mg。
10）灰化：将滤埚和灰化皿放到马弗炉中，于500℃±25℃下灰化。每次灰化后，让滤埚和灰化皿在马弗炉中初步冷却，待温热时取出，置于干燥器中，使其完全冷却，再进行称量，直至冷却后两次的称量差值不超过2mg，将最后一次称量结果记为m3，准确至0.1mg。
11）空白测定：用大约相同数量的滤器辅料按上面的“酸消解”至“灰化”步骤进行空白测定，但不加试样。灰化引起的质量损失不应超过2mg。
4.结果计算
试样中粗纤维素的含量按式（2-3-6）计算。
式中 W1——试样中粗纤维的含量（g/kg）；
m1——试样质量（g）；
m2——灰化皿、坩埚以及在130℃干燥后获得的残渣的质量（mg）；
m3——灰化皿、坩埚以及在500℃±25℃灰化后获得的残渣的质量（mg）。
双试验结果允许差不应超过平均值的1%，取平均值作为测定结果，准确至1g/kg。
5.注意事项
粗纤维含量是指按照标准规定的分析步骤，使样品经过酸和碱消解，得到的残渣经干燥、灰化后损失的部分占试样的质量分数。粗纤维含量用g/kg表示，也可用质量分数表示。
本方法适用于粗纤维含量高于10g/kg的谷物、豆类以及动物饲料中粗纤维含量的测定。由于马弗炉的温度读数可能产生误差，因此对马弗炉中的温度要定期进行校正。由于马弗炉的大小及类型不同，因此其内部不同位置的温度也会不同。在将炉门关闭后，必须有充足的空气供应。注意空气体积流速不宜过大，以免带走滤埚中的物质。
在初次使用滤埚前，应将新滤埚小心地逐步加热，温度不超过525℃，并在500℃±25℃保持数分钟。也可以使用具有相同性能的不锈钢坩埚，其不锈钢滤板的孔径为90μm。
式中 W1——试样中粗纤维的含量（g/kg）；
m1——试样质量（g）；
m2——灰化皿、坩埚以及在130℃干燥后获得的残渣的质量（mg）；
m3——灰化皿、坩埚以及在500℃±25℃灰化后获得的残渣的质量（mg）。
双试验结果允许差不应超过平均值的1%，取平均值作为测定结果，准确至1g/kg。
5.注意事项
粗纤维含量是指按照标准规定的分析步骤，使样品经过酸和碱消解，得到的残渣经干燥、灰化后损失的部分占试样的质量分数。粗纤维含量用g/kg表示，也可用质量分数表示。
本方法适用于粗纤维含量高于10g/kg的谷物、豆类以及动物饲料中粗纤维含量的测定。由于马弗炉的温度读数可能产生误差，因此对马弗炉中的温度要定期进行校正。由于马弗炉的大小及类型不同，因此其内部不同位置的温度也会不同。在将炉门关闭后，必须有充足的空气供应。注意空气体积流速不宜过大，以免带走滤埚中的物质。
在初次使用滤埚前，应将新滤埚小心地逐步加热，温度不超过525℃，并在500℃±25℃保持数分钟。也可以使用具有相同性能的不锈钢坩埚，其不锈钢滤板的孔径为90μm。
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