操作环境的无菌要求和消毒方法优化方案

1.无菌室

无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物检验提供了一个相对无菌的工作环境。在微生物检验中，要求严格的，要在无菌室内再结合使用超净工作台。

无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间，面积不宜过大，为4～5m²即可，高度为2.5m左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整，这样不易藏污纳垢，且便于清洗。无菌操作间的洁净度应达到10000级，室内温度应保持在20～24℃，湿度保持在45%～60%。超净工作台的洁净度应达到100级。无菌室和缓冲间都应装有紫外灯，无菌室的紫外灯应距离工作台面1m。

（1）无菌室使用要求

1）工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用（灭过菌）的工作服、鞋、帽子、口罩和手套（或用70%的乙醇再次擦拭双手），方可进入无菌室进行操作。

2）无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5%的甲酚溶液、70%的酒精、0.1%的新洁尔灭溶液等。

3）处理和接种食品标本时，不得随意出入无菌间，若需要传递物品，则可通过传递窗传递。

4）在检验工作中将样品及无菌物打开后，操作者在操作时应与样品及无菌物保持一定距离。未经消毒的物品及手绝对不可直接接触样品及无菌物品。样品及无菌物不可在空气中暴露过久，操作要正确。取样时必须用无菌工具（如镊子、勺子）等，手臂不可从样品及无菌物面上横过。从无菌容器或样品中取出之物虽未被污染，但也不可放回原处。瓶口、袋口开启前要用蘸75%酒精的棉球反复擦拭至少三遍（瓶口由中央到边沿，袋口由上至下擦拭）。

5）禁止在无菌室内谈笑，尽量少走动。(www.xing528.com)

6）定期对实验室内的沉降菌进行计数，以检查无菌实验室内微生物的生长繁殖动态。检查空气含菌的方法：采用营养琼脂平板，开盖暴露5min后，原位盖好，于30～32℃恒温培养2天，菌落数不超过3个。

（2）无菌室消毒要求

1）紫外线杀菌：每次打开紫外灯20～30min，就能达到空间杀菌的目的。在使用无菌室前，必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30min以上。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌30min。

2）甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40%甲醛10mL、高锰酸钾8mL，进行熏蒸。使用时，先密闭门窗，量取甲醛溶液置于容器中，然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开接种室，关紧房门，熏蒸20～30min即可。

3）化学消毒剂喷雾：根据无菌室的净化情况和空气中含有的杂菌种类，可采用不同的化学消毒剂。如果霉菌较多，则先用3%～5%的苯酚溶液喷洒室内，再用甲醛熏蒸。如果细菌较多，则可采用甲醛和乳酸交替熏蒸。

2.超净工作台

超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以保护试验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某种程度的保护，以防污染并保护操作者。与简陋的无菌罩相比，超净工作台具有允许操作者自由活动、容易达到操作区的任何地方以及安全性较高等优点。其工作原理为：通过风机将空气吸入预过滤器，经由静压箱进入高效过滤器过滤，将过滤后的空气以垂直或水平气流的状态送出，使操作区域达到百级洁净度，保证生产对环境洁净度的要求。工作人员在这样的无菌条件下操作，可保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。