如何测试Ag-SS/PEO纳米纤维膜和SS/PEO/Ag纳米纤维膜的抗菌性？

1.丝胶蛋白溶液的制备分析

取丝胶（SS，相对分子质量9万）13g、氢氧化钠0.2g、次亚磷酸钠0.5g、柠檬酸0.5g，蒸馏水13g制得丝胶溶液，通过蒸馏瓶在60℃的温度下加热60min，并且每次取硝酸银40μL分10次加入丝胶溶液中，从而得到静电纺丝溶液，得到浓度分别为0.005%、0.01%、0.012%的载银丝胶溶液。

2. PEO的制备

取PEO（相对分子质量60万）20g、蒸馏水180g进行混合搅拌，由于PEO熔点约为60℃，且能与水发生反应，也能与一般的有机溶剂发生反应，溶液有相当高的黏度。PEO需在60°C的温度下持续搅拌4h。

3.纺丝溶液制备

丝胶蛋白载银溶液由于本身所具有的凝胶特性，导致在纳米制备的期间可纺性能差，所以本实验选择加入PEO进行混合纺丝。先将载银丝胶溶液加入烧杯中，再按7∶3的比例分别加入丝胶载银溶液和PEO，用玻璃棒缓慢搅拌，均匀为止。

4.纳米纤维制备

取制备完成的纺丝溶液加入到不锈钢针头中，在滚筒收集装置放入5cm×5cm的铝箔纸收集纳米纤维，打开静电纺丝仪器进行纳米纺丝，选取30kV电压，针头与收集板之间距离为15cm，流量为0.003mL/min，在针头形成泰勒锥进行拉伸纺丝，之后再到高倍显微镜上观察探讨纳米纤维形态及表征。

5.纳米纤维膜抗菌性测试(www.xing528.com)

本实验选用革兰氏阴性大肠杆菌和革兰氏阳性金黄色葡萄球菌作为测试菌种。采用振荡烧瓶法定量测试Ag-SS/PEO纳米纤维膜和SS/PEO/Ag纳米纤维膜的抗菌性。

将抗菌纳米纤维膜试样剪切成0.5cm×0.5cm试样，称取0.75g±0.05g分装包好，在103kPa、121℃灭菌15min备用。将试样放入250mL的三角烧瓶中，分别加入70mL PBS（0.3mmol/L）和5mL菌悬液，使其在PBS中浓度为1×105～4×105CFU/mL。然后将三角烧瓶固定于振荡摇床上，在作用温度为24℃的条件下，以150r/min振摇1h，分别从三角烧瓶中吸取0.5mL振摇前、后的细菌培养液，倒置在含有琼脂培养基的平板上，37℃培养24h。抑菌率计算：

式中：R——抑菌率， %；

A——试样培养24h前平板菌落数；

B——试样培养24h后平板菌落数；

式中：R——抑菌率， %；

A——试样培养24h前平板菌落数；

B——试样培养24h后平板菌落数；