常用染色剂和培养基配制方案详解

一、吕氏碱性美蓝染色液

将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

二、革兰氏染色液配制

1.结晶紫染色液

将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

2.革兰氏碘液

将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。

3.沙黄复染液

将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。

三、Hugh-Leifson培养基（O/F试验用）

制法：将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。

四、糖发酵管

注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。

五、ONPG培养基

六、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）

七、西蒙氏柠檬酸盐培养基

八、克氏拧檬酸盐培养基

九、丙二酸钠培养基

十、葡萄糖铵培养基

注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。

十一、营养明胶

十二、硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）

十三、尿素琼脂

十四、硝酸盐培养基

十五、肉浸液肉汤

制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。

十六、营养琼脂

制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。

十七、乳糖胆盐发酵管

制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。

注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。

十八、乳糖发酵管

制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。

注：①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。

②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。

十九、缓冲蛋白胨水（BP）

制法：按上述成分配好后以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。

注：本培养基供沙门氏菌检测前增菌用。

二十、GN增菌液

制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。(www.xing528.com)

二十一、肠道菌增菌肉汤

制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶30mL，115℃高压灭菌15min。

二十二、伊红美蓝琼脂（EMB）

制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

二十三、半固体琼脂

制法：按以上成分配好，煮沸使溶解，并校正pH。分装小试管。121℃高压灭菌15min。直立凝固备用。

注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。

二十四、葡萄糖半固体发酵管

制法：将蛋白胨、牛肉膏和氯化钠加入于水中，校正pH后加入琼脂加热溶解，再加入指示剂和葡萄糖，分装小试管，灭菌121℃15min。

二十五、5%乳糖发酵管

制法：除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌121℃15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。

注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1天内发酵。

二十六、胰蛋白胨水

制法：将上述成分溶解，校正pH。分装试管，121℃高压灭菌15min。

二十七、氯化钠蔗糖琼脂

制法：将牛肉膏、蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热溶解，过滤。加入指示剂，分装烧瓶100mL。121℃高压灭菌15min备用。临用前在100mL培养基内加入蔗糖1g，加热溶化并冷至50℃，倾注平板。

二十八、Cary-Blair氏运送培养基

制法：除氯化钙外，其他均按上述成分配制，加热溶解。冷至50℃，加入氯化钙溶液，校正pH到8.4。分装试管，每支5mL，或注入具有胶塞的瓶内。121℃高压灭菌15min。

用途：作空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌采样时用。

注：在该采样管中的标本，只能保存72h。

二十九、改良磷酸盐缓冲液

制法：将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中，再加入山梨醇及胆盐，溶解后，校正pH为7.6，分装试管。于121℃高压灭菌15min，备用。

三十、明胶培养基

制法：将上述成分混合，置流动蒸气灭菌器内，加热溶解，校正pH至7.0～7.2，用绒布过滤。分装试管，121℃灭菌15min，备用。

三十一、察氏培养基

制法：加热溶解，分装后121℃灭菌20min。

用途：青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。

三十二、高盐察氏培养基

制法：加热溶解，分装后，115℃高压灭菌30min。必要时，可酌量增加琼脂。

用途：分离霉菌用。

三十三、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）

制法：将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10～20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20min。

用途：分离培养霉菌。

三十四、孟加拉红培养基

制法：上述各成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素，加入培养基中，分装后，121℃灭菌20min。

用途：分离霉菌及酵母。

三十五、玉米粉琼脂

制法：将玉米粉加入蒸馏水中，搅匀，文火煮沸1h，纱布过滤，加琼脂后加热溶化，补足水量至1000mL。分装，121℃灭菌20min。

用途：鉴定假丝酵母及霉菌。