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ELISA检测rhATIII含量的方法探讨

时间:2023-06-22 理论教育 版权反馈
【摘要】:以人血清的AT Ⅲ为标准品,抗人AT Ⅲ抗体为酶标板的包埋抗体,辣根过氧化物酶标记的抗人AT Ⅲ抗体为检测抗体,用ELISA对转ATⅢ基因的奶山羊乳汁进行检测。转基因奶山羊乳腺生物反应器为表达rhATⅢ提供了另一种安全、可靠和经济的来源。

ELISA检测rhATIII含量的方法探讨

以人血清的AT Ⅲ为标准品,抗人AT Ⅲ抗体为酶标板的包埋抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人AT Ⅲ抗体为检测抗体,用ELISA对转ATⅢ基因的奶山羊乳汁进行检测。两只克隆原代羊子代的乳汁中rhAT Ⅲ的含量测定结果分别为0.4 mg/L和3 g/L,后者属于高产转基因奶山羊,达到了大规模生产的要求,并且,rhAT Ⅲ的大小与预期一致,是与人体血浆ATⅢ相似的糖蛋白,这是细菌表达系统所不能达到的。

这里所介绍的我国科研人员构建奶山羊乳腺生物反应器表达rhAT Ⅲ与美国GTC公司制备rhAT Ⅲ有两点不同:首先,后者制备的是人AT Ⅲ原,即含有ATⅢ的信号肽部分(氨基酸1~32位)和成熟功能部分(氨基酸33~463位);其次,我国科研人员是将重组人的ATⅢ表达载体首先转入体外培养的奶山羊成纤维细胞中,然后用体细胞核移植技术(克隆技术)获得含有人ATⅢ基因的转基因奶山羊,而GTC公司的做法是将重组人AT Ⅲ表达载体直接注射到山羊受精卵的原核中,即采用原核注射法获得含有人的AT Ⅲ基因的转基因羊,其成本高,周期长。(www.xing528.com)

当前市售AT Ⅲ多为以人血浆为原料,提取分离所得,提取AT Ⅲ需要大量的血液资源,再者,人血液还有病毒污染的风险。转基因奶山羊乳腺生物反应器为表达rhATⅢ提供了另一种安全、可靠和经济的来源。

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