利用转基因羊乳腺制备人抗凝血酶Ⅲ

乳腺生物反应器的原理是将外源基因置于乳腺特异性调节序列之中，使之在乳腺中表达，然后通过收集乳汁获得具有重要价值的生物活性蛋白。抗凝血酶Ⅲ（antithrombin Ⅲ，ATⅢ）在人体中主要由肝脏合成，是存在于血浆中的一种重要的抗凝血因子，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。其主要功能是灭活凝血因子，如与凝血因子Ⅹa及Ⅺa结合并抑制其作用，在维持血液生理性凝血与抗凝血平衡中起着重要的作用。血浆中的AT Ⅲ正常含量为140～200 mg/L，但在一些疾病发生时，患者体内AT Ⅲ的含量低于正常水平，主要原因：①遗传性抗ATⅢ缺乏症；②获得性ATⅢ缺乏症；③ATⅢ消耗增多等。如多种原因所造成的血液凝固性增高，ATⅢ中和活化的凝血因子，以致消耗增加。需要指出的是，AT Ⅲ的先天性或后天获得性缺乏症可能导致其他疾病的发生，如导致血栓形成而引起脑血栓或心肌梗死等非常严重的疾病。因此，AT Ⅲ在临床上有预防和治疗急性、慢性血栓形成的作用，对治疗AT Ⅲ缺乏症有显著效果。

目前市场上有从人体血浆中直接提取的人AT Ⅲ注射针剂，也有用细胞作为表达载体在体外合成的重组人AT Ⅲ（recombinant human antithrombin Ⅲ，rhAT Ⅲ）。2006年世界上第一个利用转基因动物乳腺生物反应器生产的基因工程药用蛋白ATryn通过EMA的上市评估，次年通过美国FDA审评并获准上市。(www.xing528.com)

2008年我国科研人员也成功地利用体细胞克隆技术获得了转有人ATⅢ基因的崂山奶山羊，母羊乳汁中rhAT Ⅲ水平高达3 g/L。下面简要介绍该转基因乳腺生物反应器的构建方法。