面粉中过氧化苯甲酰的检测方法

过氧化苯甲酰（BPO）是一种常用的小麦面粉和玉米淀粉等的增白剂和改良剂。但近年研究表明，过氧化苯甲酰增白剂含量超标，会破坏面粉的营养，导致面粉中的类胡萝卜素、叶黄素等天然成分丧失。过氧化苯甲酰水解后产生的苯甲酸进入人体后要在肝脏内进行分解，因此长期过量食用过氧化苯甲酰后极易加重肝脏负担，引发多种疾病，如造成维生素缺乏，人体的肝、肾也会出现病理变化，短期过量食用会使人产生恶心、头晕、神经衰弱等中毒现象。2011年3月，卫生部联合工业和信息化部等七部门联合发布公告，禁止将过氧化苯甲酰和过氧化钙作为食品添加剂；自2011年5月1日起，禁止在面粉生产中添加过氧化苯甲酰、过氧化钙；食品添加剂生产企业不得生产和销售过氧化苯甲酰、过氧化钙；有关面粉（小麦粉）中允许添加过氧化苯甲酰、过氧化钙的食品标准内容自行废止。因此，为保证食品安全，食品中过氧化苯甲酰的检测是一项有意义的工作。面粉中过氧化苯甲酰含量的检测方法，有气相色谱法、高效液相色谱法、化学检验法、化学发光法等。国家标准《小麦粉中过氧化苯甲酰的测定方法》（GB/T 18415—2001）中采用气相色谱法。但近年来随着液相色谱技术的发展及其相对简便、快捷的样品处理方法而迅速得到广泛应用。在此介绍《小麦粉中过氧化苯甲酰的测定 高效液相色谱法》（GB/T 22325—2008）中的高效液相色谱法。

1.原理

对于由甲醇提取的过氧化苯甲酰，用碘化钾作为还原剂将其还原为苯甲酸，用高效液相色谱分离，在230nm下检测。

2.试剂与仪器

（1）试剂 本标准所用试剂除特别注明外，均为分析纯试剂，试验用水应符合GB/T 6682—2008规定的一级水要求。

1）甲醇：色谱纯。

2）碘化钾溶液：50%（质量分数水溶液）。

3）苯甲酸：纯度大于或等于99.9%，国家标准物质。

4）乙酸铵缓冲溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解，稀释至1000mL，用0.45μm滤膜过滤。

5）苯甲酸标准储备溶液（1mg/mL）：准确称取0.1000g苯甲酸，用甲醇溶解并稀释至100mL。

（2）仪器 高效液相色谱仪，配有紫外检测器或二极管阵列检测器，色谱柱为C₁₈反相柱；分析天平，感量为0.0001g；旋涡混合器；溶剂过滤器；超声波水浴。

3.分析步骤

（1）样品的制备 称取5g（准确至0.1mg）样品置于50mL具塞比色管中，加10mL甲醇，在旋涡混合器上混匀1min，静置5min，加50%碘化钾水溶液5.0mL，在漩涡混合器上混匀1min，静置，吸取上层清液，用0.22μm滤膜过滤，将滤液置于样品瓶中备用。

（2）标准曲线的绘制 准确移取苯甲酸标准储备液0mL、0.625mL、1.25mL、2.50mL、5.00mL、10.00mL、12.50mL、25.00mL，分别置于8个25mL容量瓶中，然后分别加甲醇至25.0mL，配制成质量浓度分别为0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL、200.0μg/mL、400.0μg/mL、500.0μg/mL、1000.0μg/mL的苯甲酸标准系列溶液。

分别称取8份5g（精确至0.1mg）不含苯甲酸和过氧化苯甲酰的小麦粉置于8支50mL具塞比色管中，分别准确加入苯甲酸标准系列溶液10.00mL，在旋涡混合器上混匀1min，静置5min，加50%碘化钾水溶液5.0mL，在旋涡混合器上混匀1min，静置，吸取上层清液，用0.22μm滤膜过滤，将滤液置于样品瓶中备用。标准液的最终质量浓度分别为0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、80.0μg/mL、100.0μg/mL、200.0μg/mL。依次取不同质量浓度的苯甲酸标准液10.0μL，注入液相色谱仪，以苯甲酸峰面积为纵坐标，以苯甲酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。

4.高效液相色谱检测样品参考条件(www.xing528.com)

1）C₁₈柱，内径为4.6mm，长度为250mm，粒度为5μm，不锈钢柱。

2）流动相：（1+9）甲醇-乙酸铵溶液（0.02mol/L）。

3）流速：1mL/min。

4）进样量：10μL。

5）检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器，波长为230nm。

5.测定

取样品的处理液和标准使用液各20μL（或相同体积），注入高效液相色谱仪进行分离测定，以其标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以其峰面积求出样液中被测物质的含量。

6.结果计算

按式（7-7-3）计算试样中过氧化苯甲酰的含量。

式中 X——试样中过氧化苯甲酰的含量（g/kg）；

c——由标准曲线上查出的试样测定液中相当于苯甲酸的质量浓度（μg/mL）；

V——试样提取液的体积（mL）；

0.992——由苯甲酸换算成过氧化苯甲酰的换算系数；

m——样品质量（g）。

结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测量结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。