食品中多组分有机氯农药残留量检测

有机氯农药是曾被世界各国广泛使用的高效广谱杀虫剂，主要包括以苯为原料和以环戊二烯为原料两大类。前者如杀虫剂DDT和六六六等，杀螨剂三氯杀螨砜、三氯杀螨醇等，杀菌剂五氯硝基苯、百菌清等；后者如氯丹、七氯、艾氏剂等。此外，以松节油为原料的莰烯类杀虫剂、毒杀芬和以萜烯为原料的冰片基氯也属于有机氯农药。这些有机氯农药具有一些相似的理化性质，如挥发性低、化学性质稳定、不易分解、易溶于脂肪和有机溶剂等。进一步研究表明，有机氯农药属于神经毒物和实质脏器毒物，可致癌。但由于其稳定性，致使其在禁用10余年后，仍能在水域、土壤和生物体内找到残留。《食品中有机氯农药多组分残留量的测定》（GB/T 5009.19—2008）中的毛细管柱气相色谱-电子捕获检测器法（第一法）规定了食品中六六六（HCH）、滴滴滴（DDD）、六氯苯、灭蚁灵、七氯、氯丹、艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、硫丹、五氯硝基苯的测定方法，适用于肉类、蛋类、乳类动物性食品和植物（含油脂）中α-HCH、β-HCH、γ-HCH、δ-HCH、六氯苯、五氯硝基苯、五氯苯胺、七氯、五氯苯基硫醚、艾氏剂、氧氯丹、环氧七氯、反式氯丹、α-硫丹、顺式氯丹、p，p′-滴滴伊（DDE）、狄氏剂、异狄氏剂、β-硫丹、p，p′-DDD、o，p′-DDT、异狄氏剂醛、硫丹硫酸盐、p，p′-DDT、异狄氏剂酮、灭蚁灵的分析。

图7-6-213 种有机磷农药的色谱图

1—敌敌畏 2—甲拌磷 3—二嗪磷 4—乙嘧硫磷 5—巴胺磷 6—甲基嘧啶磷 7—异稻瘟净 8—乐果 9—喹硫磷 10—甲基对硫磷 11—杀螟硫磷 12—对硫磷 13—乙硫磷

1.原理

试样中有机氯农药组分经有机溶剂提取、凝胶色谱层析净化，用毛细管柱气相色谱分离，用电子捕获检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。

2.试剂

（1）丙酮 分析纯，重蒸。

（2）石油醚 沸程为30～60℃，分析纯，重蒸。

（3）乙酸乙酯 分析纯，重蒸。

（4）环己烷 分析纯，重蒸。

（5）正己烷 分析纯，重蒸。

（6）氯化钠 分析纯。

（7）无水硫酸钠 分析纯，将无水硫酸钠置于干燥箱中，于120℃干燥4h，冷却后，密闭保存。

（8）聚苯乙烯凝胶（Bio-Beads S-X3） 200～400目，或同类产品。

（9）农药标准品 各种可检农药的标准品，纯度均应不低于98%。

（10）标准溶液的配制 分别准确称取或量取适量上述农药标准品，用少量苯溶解，再用正己烷稀释成一定浓度的标准储备溶液。量取适量标准储备溶液，用正己烷稀释为系列混合标准溶液。

3.仪器

（1）气相色谱仪 配有电子捕获检测器（ECD）

（2）凝胶净化柱 长度为30cm，内径为2.3～2.5cm的具活塞玻璃层析柱，柱底垫少许玻璃棉。用洗脱剂（1+1）乙酸乙酯-环己烷浸泡的凝胶，以湿法装入柱中，柱床高约26cm，凝胶始终保持在洗脱剂中。

（3）全自动凝胶色谱系统 带有固定波长（254nm）的紫外检测器，供选择使用。

（4）其他仪器 旋转蒸发仪、组织匀浆器、振荡器、氮气浓缩器。

4.分析步骤

（1）试样的制备 蛋品去壳，制成匀浆；肉品去筋后，切成小块，制成肉糜；乳品混匀待用。

（2）提取与分配

1）蛋类：称取20g（精确到0.01g）试样置于200mL具塞锥形瓶中，加水5mL（视试样水分含量加水，使总水量约为20g。通常鲜蛋中水分的质量分数约为75%，加水5mL即可），再加入40mL丙酮，振摇30min后，加入6g氯化钠，充分摇匀，再加入30mL石油醚，振摇30min。静置分层后，将有机相全部转移至100mL具塞锥形瓶中，用无水硫酸钠干燥，并从中量取35mL置于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加入2mL（1+1）乙酸乙酯-环己烷溶液再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1mL，供凝胶色谱层析净化使用。

2）肉类：称取20g（精确到0.01g）试样，加水15mL（视试样水分含量加水，使总水量约20g），然后加40mL丙酮，振摇30min，以下按照蛋类试样的提取、分配步骤处理。

3）乳类：称取20g（精确到0.01g）试样，鲜乳不需加水，直接加丙酮提取，以下按照蛋类试样的提取、分配步骤处理。

4）大豆油：称取1g（精确到0.01g）试样，直接加入30mL石油醚，振摇30min后，将有机相全部转移至旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加2mL（1+1）乙酸乙酯-环己烷溶液再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1mL，供凝胶色谱层析净化使用。

5）植物类：称取试样匀浆20g，加水5mL（视试样水分含量加水，使总水量约20g），然后加丙酮40mL，振荡30min，加氯化钠6g，摇匀，加石油醚30mL，再振荡30min，以下按照蛋类试样的提取、分配步骤处理。

（3）净化 手动凝胶色谱柱的净化：将试样浓缩液经凝胶柱用（1+1）乙酸乙酯-环己烷溶液洗脱，弃去0～35mL流分，收集35～70mL流分，然后将其旋转蒸发浓缩至约1mL，再经凝胶柱净化收集35～70mL流分，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂，用正己烷定容至1mL，留待GC分析。

（4）测定

1）气相色谱参考条件(www.xing528.com)

①色谱柱：DM-5石英弹性毛细管柱，长度为30m，内径为0.32mm，膜厚为0.25μm，或等效柱。

②柱温：程序升温。

③进样口温度：280℃。不分流进样，进样量为1μL。

④检测器：电子捕获检测器（ECD），温度为300℃。

⑤载气流速：氮气，流速为1mL/min；尾吹，流速为25mL/min。

⑥柱前压：0.5mPa。

2）色谱分析：分别吸取1μL混合标准液及试样净化液注入气相色谱仪中，记录色谱图，以保留时间定性，以试样和标准的峰高或峰面积比较定量。

3）色谱图：图7-6-3为各种有机氯农药的流出色谱图。出峰顺序为：α-六六六、六氯苯、β-六六六、γ-六六六、五氯硝基苯、δ-六六六、五氯苯胺、七氯、五氯苯基硫醚、艾氏剂、氧氯丹、环氧七氯、反氯丹、α-硫丹、顺氯丹、p，p′-DDE、狄氏剂、异狄氏剂、β-硫丹、p，p′-DDD、o，p′-DDD、异狄氏剂醛、硫丹硫酸盐、p，p′-DDT、异狄氏剂酮、灭蚁灵。

5.结果计算

试样中各农药的含量按式（7-6-3）进行计算。

式中 X——试样中各农药的含量（mg/kg）；

m₁——被测样液中各农药的质量（ng）；

V₁——样液进样体积（μL）；

f——稀释因子；

m——试样质量（g）；

V₂——样液最后定容体积（mL）。

图7-6-3 有机氯农药混合标准溶液的色谱图

注：图上数字表示出峰顺序。

计算结果保留两位有效数字。

6.精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

7.试验说明

1）本方法适用于肉类、蛋类、乳类动物性食品和植物（含油脂）中有机氯农药的测定。

2）此方法对各种有机氯农药的检出限（由特定的分析步骤能够合理地检测出的最小分析信号求得的最低浓度或质量）因试样基质的不同而不同，见表7-6-1。

表7-6-1 有机氯农药的检出限

（续）