食品中红色诱惑的检测方法

诱惑红为食用合成色素，着色牢度强，溶于水。在我国，诱惑红可作为食品添加剂用于食品中，并规定诱惑红可用于糖果、冷饮、固体饮料等。近年又增补标准，规定诱惑红用于肉灌肠时最大使用量为0.015g/kg，用于西式火腿、果冻时最大使用量为0.025g/kg。诱惑红的使用日益广泛，对其的检测也显得越来越重要。目前，《食品中诱惑红的测定》（GB/T 5009.141—2003）规定的诱惑红检测方法为分光光度计法。

1.原理

诱惑红在酸性条件下被聚酰胺粉吸附，而在碱性条件下解吸附，再用纸色谱进行分离，与标准比较定性、定量。

2.试剂与仪器

（1）试剂

1）常用试剂：石油醚（沸程为30～60℃）、甲醇、200目的聚酰胺粉（尼龙6）、（1+10）硫酸、50g/L氢氧化钠、200g/L柠檬酸溶液、100g/L钨酸钠溶液、体积分数50%的乙醇溶液。

2）海沙：先用（1+10）盐酸煮沸15min，并用水洗至中性，再用氢氧化钠（50g/L）煮沸15min，用水洗至中性，然后于105℃干燥，储于具塞瓶中保存，备用。

3）乙醇-氨溶液：取2mL的氨水，加70%（体积分数）乙醇至100mL。

4）pH=6的水：用200g/L的柠檬酸调至pH=6。

5）诱惑红的标准溶液：准确称取0.025g诱惑红，加水溶解，并定容至25mL。此液诱惑红的含量为1mg/mL。

6）诱惑红的标准使用溶液：吸取诱惑红的标准溶液5.0mL置于50mL容量瓶中，加水稀释到50mL。此液诱惑红的含量为0.1mg/mL。

7）展开剂

①A展开剂：（7+3+3+0.5）丁酮-丙醇-水-氨水溶液。

②B展开剂：（6+2+3）正丁醇-无水乙醇-1%氨水溶液。

③C展开剂：（8+1+2）2.5%柠檬酸钠-氨水-乙醇溶液。

（2）仪器 可见分光光度计、微量注射器（10μL、50μL）、展开槽、电吹风机、滤纸（中速滤纸，纸色谱用）、恒温水浴锅、台式离心机。

3.样品的处理

（1）汽水 将样品加热去二氧化碳后，称取10.0g样品置于烧杯中，然后用200g/L柠檬酸调至呈酸性，加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素，将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤，用pH=4的酸性热水洗涤多次（约200mL），以洗去糖等物质。若有天然色素，则用甲醇-甲酸溶液洗涤1～3次，每次20mL，至洗液无色为止，再用70℃的水多次洗涤至流出液呈中性。在洗涤过程中，必须充分搅拌，然后用乙醇-氨溶液分数次解吸色素。收集全部解吸液，置于水浴上驱除氨，蒸发至2mL左右，转入5mL的容量瓶中，用50%乙醇分数次洗涤蒸发皿，将洗涤液并入5mL的容量瓶中，再用50%乙醇定容至刻度。此液用于纸色谱。(www.xing528.com)

（2）硬糖 称取10.0g已粉碎的样品，加30mL水，温热溶解。若样品溶液的pH值较高，则用200g/L柠檬酸溶液调至pH=4左右，以下从（1）中的“加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素”起操作。

（3）糕点 称取10.0g已粉碎的样品，加入30mL石油醚提取脂肪，共提三次，然后用电吹风吹干，倒入漏斗中，用乙醇-氨溶液解吸色素，待解吸液置于水浴上蒸发至20mL，加入1mL 100g/L的钨酸钠溶液沉淀蛋白，真空抽滤，用乙醇-氨溶液解吸滤纸上的诱惑红，然后将滤液置于水浴中挥去氨，调至酸性，以下从（1）中的“加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素”起操作。

（4）冰淇淋 称取10.0g已均匀的样品置于烧杯中，加入20g海沙和15mL石油醚提取脂肪，提取2次，倾去石油醚，然后在50℃的水浴上挥去石油醚，再加入乙醇-氨溶液解吸诱惑红，将解吸液倒入100mL蒸发皿中，直至解吸液无色。将解吸液置于水浴上挥去乙醇，当体积约为20mL时，加入1mL（1+10）硫酸和1mL 100g/L的钨酸钠溶液沉淀蛋白，放置2min，然后用乙醇-氨溶液调至呈碱性。将溶液转入离心管中，以5000r/min的转速离心15min，倾出上清液，置于水浴中挥去乙醇，然后用200g/L柠檬酸溶液调至酸性，以下从（1）中的“加入0.5～1.0g聚酰胺粉吸附色素”起操作。

4.定性

取色谱用纸，在距底边2cm的起始线上分别点3～10μL的试样处理液和1mL色素标准液，分别挂于盛有A、B、C展开剂的展开槽中，用上行法展开，当溶剂前沿展至15cm处时，将滤纸取出在空气中晾干，与标准斑比较定性。

5.定量

（1）标准曲线的制备 吸取0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL诱惑红标准使用液，分别置于10mL比色管中，各加水稀释到刻度。用1cm比色杯，以零管调零点，于波长500nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

（2）试样的测定 取色谱用纸，在距离底边2cm的起始线上点0.20mL样品的处理液，从左至右点成条状。在纸的右边点诱惑红的标准溶液1μL，依法展开，取出晾干。将样品的色带剪下，用少量热水洗涤数次，将洗液移入10mL比色管中，加水稀释至刻度，混匀后，与标准管同时在500nm处测定吸光度。

6.结果计算

试样中诱惑红的含量按式（7-3-12）计算。

式中 X——试样中诱惑红的含量（g/kg）；

m₁——测定用试样处理液中诱惑红的质量（mg）；

m——试样质量（g）；

V₁——试样解吸后的总体积（mL）；

V₂——试样纸层析用体积（mL）。

计算结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。