食品中的脂肪是重要的营养成分之一。脂肪是人体组织细胞的一个重要成分,是一种富含热能的营养素,也是脂肪溶性维生素的良好溶剂,有助于脂溶性维生素的吸收。脂肪与蛋白质结合生成的脂蛋白,在调节人本生理机能、完全生化反应方面具有重要的作用。因此,各种食品中脂肪的含量是重要的质量指标之一。
食品中的脂肪既有游离态的(如动物性脂肪和植物性油脂),也有结合态的(如天然存在的磷脂、糖脂、脂蛋白及其某些加工食品如焙烤食品、麦乳精等中的脂肪,与蛋白质或碳水化合物等形成结合态)。对于大多数食品来说,游离态的脂肪是主要的,结合态的脂肪含量较少。
不同种类的食品,由于其中脂肪的含量及存在形式不同,因此测定脂肪的方法也就不同。测定食品中脂肪含量的方法有索氏提取法、酸水解法、碱水解法、皂化法等。脂类不溶于水,易溶于有机溶剂,所以脂类的测定大多采用低沸点有机溶剂萃取的方法。现有的食品脂肪含量标准分析方法都采用乙醚作为提取剂,但是含水乙醚会同时抽出糖分等非脂成分。石油醚具有较高的沸点(沸程为35~45℃),吸收水分比乙醚少,没有乙醚易燃,用它作提取剂时,允许样品含有微量的水分。因两者各有特点,故常常混合使用。使用索氏抽提法所测得的脂肪为游离脂肪,除脂肪外,还含色素及挥发油、蜡、树脂等物,称为粗脂肪。预先用酸或碱破坏脂类和非脂的结合后,再使用有机溶剂萃取,不仅能提取游离态的脂肪,而且能提取结合态的脂肪。氯仿-甲醇是另一种有效的溶剂,对脂蛋白、磷脂的提取效率较高,特别适用于水产品、家禽、蛋制品等食品中脂肪的提取。罗紫-哥特里法、巴布科克氏法和盖勃氏法主要用于乳及乳制品中脂类的测定。
1.索氏抽提法
(1)原理 索氏抽提法是经典方法,适用于脂类含量较高,含结合态脂肪较少,能烘干磨细,不易吸潮结块的样品的测定。将经过预处理而干燥分散的样品,用无水乙醚或石油醚等溶剂进行提取,使样品中的脂肪进入溶剂当中,然后从提取液中回收溶剂,最后所得到的残留物即为脂肪(或粗脂肪)。该方法测得的仅仅是游离态脂肪的含量,而不能测出结合态脂肪的含量。
(2)主要仪器 索氏抽提器(见图7-1-1)、电热恒温水浴锅、电热恒温干燥箱(100℃±5℃)、分析天平(感量为0.1mg)、备有变色硅胶的干燥器、滤纸筒(取长28cm、宽17cm的滤纸,用直径为2cm的试管,沿滤纸长边卷成筒形,抽出试管至纸筒高度的1/2处,压平抽空部分,折过来,使之紧靠试管外层,用脱脂线系住,将下部的折角向上折,压成圆形底部,抽出试管,即成直径为2cm、高约为7.5cm的滤纸筒。滤纸应事先放入烧杯,于100~105℃烘箱烘至恒重)、圆孔筛(直径为1mm)、脱脂线、脱脂棉(将医用级棉花在乙醚或己烷中浸泡24h,期间搅拌数次,取出在空气中晾干)、称量皿(铝质或玻璃质,内径为60~65mm,高度为25~30mm)、粉碎机。
图7-1-1 索氏抽提器
1—接收瓶 2—滤纸筒 3—提取管 4—冷凝管
(3)所需试剂
1)无水乙醚:分析纯,不含过氧化物。
2)石油醚:分析纯,沸程为30~60℃。
3)海砂或河砂:直径为0.65~0.85mm,二氧化硅含量不低于99%(质量分数)。取用水洗去泥土的海砂或河砂,先用(1+1)盐酸煮沸0.5h,再用水洗至中性,然后用氢氧化钠溶液(240g/L)煮沸0.5h,用水洗至中性,经100℃±5℃干燥备用。
(4)检验过程
1)将索氏抽提器各部位充分洗涤并用蒸馏水清洗、烘干。将接收瓶洗净置于电热恒温干燥箱中干燥至恒重,称取其质量,前后两次称量值之差应在0.002g以内。
2)试样的处理。将要检验的果蔬脆片用粉碎机粉碎,过40目筛,准确称取2.00~5.00g(可取测定水分后的试样,必要时拌以海砂),全部转移至滤纸筒(筒口放置少量脱脂棉)中。
其他样品的处理:
①固体样品:精确称取于100~105℃烘干并研细的样品2~5g(可取测定水分后的试样),装入脂肪抽提器滤纸筒内。
②半固体或液体样品:精确称取5.0~10.0g样品置于蒸发皿中,加入海砂约20g,于沸水浴上蒸干后,再于95~105℃烘干,磨细,全部移入滤纸筒内,蒸发皿及粘有样品的玻璃棒用蘸有乙醚(或石油醚)的脱脂棉擦净,将棉花一同放入滤纸筒内。
3)抽提:将装有试样的滤纸筒置于索氏抽提器的抽提管内(滤纸筒的高度不能超过抽提筒虹吸管的高度),连接已干燥至恒重的接收瓶,由抽提器冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的2/3处,于水浴(夏天65℃,冬天80℃左右)上加热,使乙醚或石油醚不断回流萃取。抽提速度以每分钟滴80滴左右,每小时回流6~12次为宜,一般回流萃取6~12h。提取结束时,用磨砂玻璃接取一滴提取液,若磨砂玻璃上无油斑,则表明提取完毕。
4)烘干、称量:提取完毕后,用长柄镊子取出滤纸筒,从索氏抽提器上取下接收瓶,回收乙醚或石油醚,当接收瓶内乙醚剩1~2mL时在水浴上蒸干,再于100℃±5℃恒温干燥箱中干燥2h,然后放于干燥器中冷却30~45min至室温,称量。重复以上操作,直至两次称量值之差不超过0.002g即为恒重。准确称量(精确到0.1mg)。
(5)结果计算
式中 X——样品中脂肪的质量分数;
m2——接收瓶和脂肪的质量(g);
m1——接收瓶的质量(g);
m——样品的质量(g)。
(6)注意事项
1)样品必须干燥,因为样品中含水分时会影响溶剂提取效果,造成非脂成分的溶出。滤纸筒的高度不要超过回流弯管,否则弯管中样品的脂肪不能提尽,造成测定误差。
2)乙醚回收后,剩下的乙醚必须在水浴上彻底挥发干净,否则放入烘箱中有爆炸的危险。在使用乙醚的过程中,室内应保持良好的通风状态,仪器周围不能有明火,以防空气中有乙醚蒸气而引起着火或爆炸。
3)脂肪接收瓶反复加热时,会因脂类氧化而增重。质量增加时,应以增重前的质量为准。对富含脂肪的样品,可在真空烘箱中进行干燥,这样可避免因脂肪氧化而造成的误差。
4)抽提是否完全,可凭经验检查,也可用滤纸或毛玻璃检查;使抽提管下口滴下的乙醚(或石油醚)滴在滤纸或毛玻璃上,若挥发后不留下痕迹,则表明已抽提完全。
5)抽提所用的乙醚或石油醚要求无水、无醇、无过氧化物,挥发残渣含量低,因水和醇会导致糖类及水溶性盐类等物质溶出,使测定结果偏高。过氧化物会导致脂肪氧化,在烘干时还有爆炸的危险。
6)索氏抽提法为经典方法,测定准确,但费时、费试剂。
7)精密度要求:在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%,否则本次检验结果为无效。
8)计算结果保留到小数点后一位。
2.酸水解法
(1)原理 样品经酸水解后用乙醚提取,除去溶剂即得游离脂肪及结合脂肪的总量。
(2)所需试剂 盐酸、95%乙醇、乙醚、石油醚(30~60℃沸程)。
(3)仪器100mL具塞量筒,如图7-1-2所示。
(4)操作方法
图7-1-2 100mL具塞量筒
1)样品的处理
①固体样品:精密称取约2.00g样品,置于50mL大试管内,加8mL水,混匀后再加10mL盐酸。
②液体样品:称取10.0g样品,置于50mL大试管内,加10mL盐酸。
2)水解:将试管放入70~80℃水浴中,每隔5~10min用玻璃棒搅拌一次,至样品消化完全为止,时间为40~50min。
3)提取:取出试管,加入10mL乙醚,混合,冷却后将混合物移入100mL具塞量筒中,以25mL乙醚分数次洗试管,将洗液一并倒入量筒中。待乙醚全部倒入量筒后,加塞振摇1min,小心开塞,放出气体,再加塞塞好,静置12min,小心开塞,并用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置10~20min,待上部液体清晰,吸出上清液置于已恒重的锥形瓶内,再向带塞的量筒内加5mL乙醚,振摇,静置后,仍将上层乙醚吸出,放入原锥形瓶内,将锥形瓶置于水浴上蒸干,置于90~105℃烘箱中干燥2h,取出,放入干燥器内冷却0.5h后称量。重复以上操作至恒重。
(5)结果计算 同索氏抽提法。
(6)注意事项
1)本方法适用于各类食品中脂肪的测定。特别是样品易吸湿,不易烘干,不能使用索氏抽提法时,本方法效果较好。
2)由于样品加热、加酸水解后,可使结合脂肪游离,故本方法可测定食品中的总脂肪,包括结合脂肪和游离脂肪。
3)样品应磨细,否则消化不完全,影响测定结果。
4)水解时,注意防止水分大量损失,以免酸度过高。
5)固体样品消化时加入8mL水是为了防止加盐酸时干试样固化。水解后加入10mL乙醇可使蛋白质沉淀,降低表面张力,促进脂肪球聚合,同时溶解一些糖类(如低聚糖等)。
6)用乙醚提取脂肪时,因乙醇可溶于乙醚,故需加入石油醚,降低乙醇在乙醚中的溶解度,使乙醇溶解物留在水层,并使分层清晰。
7)溶剂被挥干后,若残留物中有黑色焦油状杂质,则由分解物与水一同混入所致,会使结果偏高,可用等量乙醚及石油醚溶解后过滤,再次进行蒸干、干燥,至恒重。
8)精密度要求:在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%,否则本次检验结果为无效。
9)计算结果保留到小数点后一位。
3.氯仿-甲醇提取法
本方法适合于结合态脂类含量比较高,特别是磷脂含量高的样品,如鲜鱼、贝类、肉、禽、蛋及其制品等,对含水量高的试样更为有效。对于干燥的试样,可在试样中加入一定量的水,使组织膨润后再提取。
(1)原理 将试样分散于氯仿-甲醇混合液中,在水浴中轻微沸腾,氯仿-甲醇及样品中一定的水分形成提取脂类的溶剂,在使样品中的结合态脂类游离出来的同时,与磷脂等极性脂类的亲和性增大,从而有效地提取出全部脂类,经过滤除去非脂成分,回收溶剂,用石油醚提取残留脂类,蒸去石油醚后定量。
(2)所需试剂 氯仿(体积分数在97%以上)、甲醇(体积分数在96%以上)、氯仿-甲醇混合液(按2∶1体积比混合)、石油醚、无水硫酸钠(特级,在120~135℃,干燥1~2h)。
(3)所需仪器 提取装置、具塞离心管、离心机(转速为3000r/min)、布氏漏斗(过滤板直径为40mm,容量为60~100mL)、具塞锥形瓶。
(4)检验过程
1)提取:准确称取5g样品,放入200mL具塞锥形瓶中(对于高水分食品,可加适量硅藻土使其分散),加入60mL氯仿-甲醇混合液(干燥食品可加入2~3mL水),连接提取装置,于60℃水浴中。提取1h(从微沸开始计时)。
2)回收溶剂:提取结束后,取下锥形瓶,用布氏漏斗过滤,滤液用另一具塞锥形瓶收集,然后用氯仿-甲醇混合液洗涤锥形瓶、滤器及滤器中的试样残渣,将洗涤液并入滤液中,置于65~70℃水浴中回收溶剂,至锥形瓶内物料显浓稠态(但不能使其干涸)时冷却。
3)萃取、定量:用移液管加入25mL石油醚,再加入15g无水硫酸钠,立刻加塞振荡10min,将醚层移入具塞离心沉淀管中,以3000r/min的转速离心5min进行分离,然后用移液管迅速吸取离心管中澄清的醚层10mL,置于已恒重的称量瓶内,蒸发去除石油醚后,于100~105℃的烘箱中烘至恒重(约30min)。
(5)结果计算
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式中 X——样品中脂肪的质量分数;
m——试样质量(g);
m1——称量瓶质量(g);
m2——称量瓶与脂肪的质量(g);
2.5——从25mL醚层中取10mL进行干燥,故乘以系数2.5。
(6)说明
1)提取结束后,用玻璃过滤器过滤,再用溶剂洗涤锥形瓶,每5mL洗3次,然后用30mL溶剂洗涤残渣及滤器。洗涤残渣时可用玻璃棒一边搅拌试样残渣,一边用溶剂洗涤。
2)将溶剂回收至残留物尚具有一定的流动性,不能完全干涸,否则脂类难以溶解于石油醚中,从而使测定结果偏低,所以最好在残留有适量水分时停止蒸发。
3)在进行萃取时,无水硫酸钠必须在石油醚之后加入,以免影响石油醚对脂肪的溶解。其加入量可根据残留物中水分的含量来确定,一般为5~15g。
4.婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定(第一法)(GB 5413.3—2010)
本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳、乳粉、炼乳、奶油、稀奶油、干酪和婴幼儿配方食品中脂肪的测定。
(1)原理 用乙醚和石油醚抽提样品的碱水解液,通过蒸馏或蒸发去除溶剂,测定溶于溶剂中的抽提物的质量。
(2)所需试剂
1)淀粉酶:酶活力大于或等于1.5U/mg。
2)氨水(NH4OH):质量分数约为25%。可使用比此含量更高的氨水。
3)乙醇(C2H5OH):体积分数至少为95%。
4)乙醚(C4H10O):不含过氧化物,不含抗氧化剂,并满足试验的要求。
5)石油醚(CnH2n+2):沸程为30~60℃。
6)混合溶剂:等体积混合乙醚和石油醚,使用前制备。
7)碘溶液(I2):约0.1mol/L。
8)刚果红溶液(C32H22N6Na2O6S2):将1g刚果红溶于水中,稀释至100mL。
9)盐酸(6mol/L):量取50mL盐酸(12mol/L)缓慢倒入40mL水中,定容至100mL,混匀。
(3)所需仪器 分析天平(感量为0.1mg)、离心机(可用于放置抽脂瓶或管,转速为500~600r/min,可在抽脂瓶外端产生80~90g的重力场)、烘箱、水浴、抽脂瓶(应带有软木塞或其他不影响溶剂使用的瓶塞,如硅胶或聚四氟乙烯。软木塞应先浸于乙醚中,后放入60℃或60℃以上的水中保持至少15min,冷却后使用。不用时需浸泡在水中,浸泡用水每天更换一次)。
(4)检验过程
1)用于脂肪收集的容器(脂肪收集瓶)的准备 于干燥的脂肪收集瓶中加入几粒沸石,放入烘箱中干燥1h,使脂肪收集瓶冷却至室温,称量,精确至0.1mg。
2)空白试验 空白试验与样品检验同时进行,使用相同步骤和相同试剂,但用10mL水代替试样。
3)测定
①样品预处理:如果试样是巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳,则称取充分混匀的试样10g(精确至0.0001g)置于抽脂瓶中。
如果试样是不含淀粉的乳粉和乳基婴幼儿食品,则称取混匀后的试样(高脂乳粉、全脂乳粉、全脂加糖乳粉和乳基婴幼儿食品约1g,精确至0.0001g;脱脂乳粉、乳清粉、酪乳粉约1.5g,精确至0.0001g),加入10mL65℃±5℃的水,将试样洗入抽脂瓶的小球中,充分混合,直到试样完全分散,放入流动水中冷却。
如果试样是含淀粉的乳粉和乳基婴幼儿食品,则将试样放入抽脂瓶中,加入约0.1g淀粉酶和一根小磁性搅拌棒,混合均匀后,加入8~10mL45℃的蒸馏水(注意液面不要太高),盖上瓶塞,于搅拌状态下在65℃水浴中保温2h,每隔10min摇混一次。为检验淀粉是否水解完全,可加入两滴0.1mol/L的碘溶液,若无蓝色出现,则说明水解完全,否则将抽脂瓶重新置于水浴中,直至无蓝色产生。冷却抽脂瓶。
如果试样是炼乳,则脱脂炼乳、全脂炼乳和部分脱脂炼乳称取3~5g,高脂炼乳称取约1.5g(精确至0.0001g),用10mL蒸馏水,分数次洗入抽脂瓶小球中,充分混合均匀。
如果试样是奶油、稀奶油,则先将奶油试样放入温水浴中溶解并混合均匀后,称取试样约0.5g(精确至0.0001g),稀奶油称取1g,置于抽脂瓶中,加入8~10mL45℃的蒸馏水。
如果试样是干酪,则称取2g研碎的试样(精确至0.0001g)置于抽脂瓶中,加10mL盐酸,混匀,加塞,于沸水中加热20~30min。
②检测:向抽脂瓶中加入2.0mL氨水,充分混合后立即将抽脂瓶放入65℃±5℃的水浴中,加热15~20min,不时取出振荡。取出后,冷却至室温,静止30s后,加入10mL乙醇,缓和但彻底地进行混合,避免液体太接近瓶颈。如果需要,则可加入两滴刚果红溶液。加入25mL乙醚,塞上瓶塞,将抽脂瓶保持在水平位置,将小球的延伸部分朝上夹到摇混器上,按约100次/min的频率振荡1min,也可采用手动振摇方式,但均应注意避免形成持久乳化液。在抽脂瓶冷却后小心地打开塞子,用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈,使冲洗液流入抽脂瓶。
加入25mL石油醚,塞上重新润湿的塞子,轻轻振荡30s。将加塞的抽脂瓶放入离心机中,以500~600r/min的转速离心5min,否则将抽脂瓶静止至少30min,直到上层液澄清,并明显与水分离。
图7-1-3 倾倒醚层前
小心地打开瓶塞,用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁,使冲洗液流入抽脂瓶。如果两相界面低于小球与瓶身相接处,则沿瓶壁边缘慢慢地加入水,使液面高于小球和瓶身相接处(见图7-1-3),以便于倾倒。将上层液尽可能地倒入已准备好的加入沸石的脂肪收集瓶中,避免倒出水层(见图7-1-4)。用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部,将冲洗液收集在脂肪收集瓶中。要防止溶剂溅到抽脂瓶的外面。
图7-1-4 倾倒醚层后
向抽脂瓶中加入5mL乙醇,用乙醇冲洗瓶颈内壁,混合。用15mL乙醚和15mL石油醚进行第二次抽提,同样进行第三次抽提,但只用15mL乙醚和15mL石油醚。如果产品中脂肪的质量分数低于5%,可只进行两次抽提。
合并所有提取液,既可采用蒸馏的方法除去脂肪收集瓶中的溶剂,也可于沸水浴上蒸发至干来除掉溶剂。蒸馏前用少量混合溶剂冲洗瓶颈内部。将脂肪收集瓶放入102℃±2℃的烘箱中加热1h,取出脂肪收集瓶,冷却至室温,称量,精确至0.1mg。重复烘干操作,直到脂肪收集瓶两次连续称量差值不超过0.5mg,记录脂肪收集瓶和抽提物的最低质量。
为验证抽提物是否全部溶解,向脂肪收集瓶中加入25mL石油醚,微热,振摇,直到脂肪全部溶解。如果抽提物全部溶于石油醚中,则含抽提物的脂肪收集瓶的最终质量和最初质量之差即为脂肪含量。若抽提物未全部溶于石油醚中,或怀疑抽提物不全部为脂肪,则用热的石油醚洗提。小心地倒出石油醚,不要倒出任何不溶物,重复此操作3次以上,再用石油醚冲洗脂肪收集瓶口的内部。最后,用混合溶剂冲洗脂肪收集瓶口的外部,避免溶液溅到瓶的外壁。将脂肪收集瓶放入102℃±2℃的烘箱中,加热1h,恒重后称量。将测得的质量之差作为脂肪的质量。
(5)结果计算 样品中脂肪的含量按式(7-1-6)计算。
式中 X——样品中脂肪的含量(g/100g);
m——样品的质量(g);
m1——测得的脂肪收集瓶和抽提物的质量(g);
m2——脂肪收集瓶的质量,或在有不溶物存在下,测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量(g);
m3——空白试验中,脂肪收集瓶和测得的抽提物的质量(g);
m4——空白试验中脂肪收集瓶的质量,或在有不溶物存在时,测得的脂肪收集瓶和不溶物的质量(g)。
结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留三位有效数字。
精密度要求:在重复性条件下获得的两次独立测定结果之差应符合:当脂肪含量大于或等于15%时,结果之差小于或等于0.3g/100g;当脂肪含量为5%~15%时,结果之差小于或等于0.2g/100g;当脂肪含量小于或等于5%时,结果之差小于或等于0.1g/100g。
(6)注意事项
1)要进行空白试验,以消除环境及温度对检验结果的影响。进行空白试验时,在脂肪收集瓶中放入1g新鲜的无水奶油。必要时,于每100mL溶剂中加入1g无水奶油后重新蒸馏,重新蒸馏后必须尽快使用。
2)空白试验与样品的测定同时进行。对于存在非挥发性物质的试剂,可用与样品的测定同时进行的空白试验值进行校正。抽脂瓶与天平室之间的温差可对抽提物的质量产生影响。在理想的条件下(试剂空白值低,天平室温度相同,脂肪收集瓶充分冷却),该值通常小于0.5mg。在常规测定中,可忽略不计。如果全部试剂空白残余物大于0.5mg,则分别蒸馏100mL乙醚和石油醚,测定溶剂残余物的含量。用空的控制瓶测得的量和每种溶剂的残余物的含量都不应超过0.5mg,否则应更换不合格的试剂或对试剂进行提纯。
3)乙醚中过氧化物的检验:取一只玻璃小量筒,用乙醚冲洗,然后加入10mL乙醚,再加入1mL新制备的100g/L的碘化钾溶剂,振荡,静置1min,两相中均不得有黄色。也可使用其他适当的方法检验过氧化物。
在不加抗氧化剂的情况下,为长久保证乙醚中无过氧化物,使用前三天按以下法处理:
①将锌箔削成长条,长度至少为乙醚瓶高度的1/2,每升乙醚用80cm2锌箔。
②使用前,将锌片完全浸入每升中含有10g五水硫酸铜和2mL质量分数为98%的硫酸中并保持1min,然后取出,用水轻轻彻底地冲洗锌片,将湿的镀铜锌片放入乙醚瓶中即可。也可以使用其他方法,但不得影响检测结果。
5.婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定(第二法)(GB 5413.3—2010)
本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳中脂肪的测定。
(1)原理 在乳中加入硫酸破坏乳胶质性和覆盖在脂肪球上的蛋白质外膜,离心分离脂肪后测量其体积。
(2)所需试剂 硫酸(分析纯,ρ20≈1.84g/L)、异戊醇(分析纯)。
(3)所需仪器 乳脂离心机、盖勃氏乳脂计(最小刻度值为0.1%,见图7-1-5)、0.75mL单标乳吸管。
(4)检验 于盖勃氏乳脂计中先加入10mL硫酸,再沿着管壁小心准确地加入10.75mL样品,使样品与硫酸不要混合,然后加1mL异戊醇,塞上橡胶塞,使瓶口向下,同时用布包裹以防冲出,用力振摇使其呈均匀棕色液体,静置数分钟(瓶口向下),置于65~70℃的水浴中5min,取出后置于乳脂离心机中以1100r/min的转速离心5min,再置于65~70℃的水浴水中保温5min(注意水浴水面应高于乳脂计脂肪层),取出,立即读数,即为脂肪的含量。
图7-1-5 盖勃氏乳脂计
(5)精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。
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