1.无菌室
无菌室通过空气的净化和空间的消毒，可为微生物检验提供一个相对无菌的工作环境。在微生物检验中，要求严格的操作要在无菌室内再结合使用超净工作台。
无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间，面积不宜过大，4～5m2即可，高度为2.5m左右。无菌室外要设一个缓冲间。缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。无菌操作间的洁净度应达到10000级，室内温度保持在20～24℃，湿度保持在45%～60%。超净工作台的洁净度应达到100级。无菌室和缓冲间都应装有紫外光灯，无菌室的紫外光灯应距离工作台面1m。
（1）无菌室使用要求
1）工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间内更换专用（灭过菌）的工作服、鞋、帽子、口罩和手套（或用体积分数为70%的乙醇再次擦拭双手），方可进入无菌室进行操作。
2）无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。无菌室应备有工作浓度的消毒液，如体积分数为5%的甲酚溶液、体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的新洁尔灭（苯扎氯铵）溶液等。
3）在无菌间内处理和接种食品标本时，不得随意出入，若需要传递物品，则可通过传递窗传递。
4）在样品及无菌物打开后，操作者在操作时应与样品及无菌物保持一定距离；未经消毒的物品及手绝对不可直接接触样品及无菌物品；样品及无菌物不可在空气中暴露过久，操作要正确；取样时必须用无菌工具（如镊子、勺子）等，手臂不可从样品及无菌物面上横过；从无菌容器中或样品中取出的物品虽未被污染，但也不可放回原处；瓶口、袋口开启前用体积分数为75%的酒精棉球反复擦拭至少三遍（瓶口由中央到边沿，袋口由上至下擦拭）。
5）禁止在无菌室内谈笑，尽量少走动。
6）定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室内微生物的生长繁殖动态。检查空气含菌量的方法通常为：将营养琼脂平板5min开盖暴露后原位盖好，于30～32℃恒温培养2天，菌落数不超过3个。
（2）无菌室的消毒要求
1）紫外线杀菌。每次开紫外光灯20～30min，就能达到空间杀菌的目的。在使用无菌室前必须打开无菌室的紫外光灯辐照灭菌30min以上。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外光灯辐照灭菌30min。
2）甲醛和高锰酸钾混合熏蒸。一般每平方米需体积分数为40%的甲醛10mL、高锰酸钾8mL，进行熏蒸。使用时，先密闭门窗，将甲醛溶液盛入容器中，然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开接种室，关紧房门，熏蒸20～30min即可。
3）化学消毒剂喷雾。根据无菌室的净化情况和空气中含有的杂菌种类，可采用不同的化学消毒剂。如果霉菌较多，则先用质量分数为3%～5%的苯酚溶液喷洒室内，再用甲醛熏蒸。如果细菌较多，则可采用甲醛和乳酸交替熏蒸。
2.超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以保护试验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程度的保护以防污染并保护操作者。与简陋的无菌罩相比，超净工作台具有允许操作者自由活动，容易达到操作区的任何地方以及安全性较高等优点。其工作原理为：通过风机将空气吸入预过滤器，经由静压箱进入高效过滤器过滤，将过滤后的空气以垂直或水平气流的状态送出，使操作区域达到百级洁净度，保证生产对环境洁净度的要求。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。
（1）超净工作台的使用
1）安放点的选择
①最好将其置于一间有空气消毒设施的无菌室内，如果条件不具备，则应将其安放于人员走动少、较清洁的房间中。
②调整各脚的高度，以保证稳妥和操作面水平。超净工作台应采用一条专门电路供电，以避免电路过载而造成空气流速的改变。
2）使用前的检查
①接通超净工作台的电源。
②旋开风机开关，使风机开始正常运转，这时应检查高效过滤器出风面是否有风送出。(www.xing528.com)
③检查照明及紫外设备能否正常运行，若不能正常运行，则通知工程部检验。
④在工作前必须对超净工作台四周环境及空气进行超净处理，认真进行清洁工作，并采用紫外线灭菌法进行灭菌处理。
⑤净化工作区内严禁存放不必要的物品，以保证洁净气流活动不受干扰。
3）使用
①在使用超净工作台前，先用清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。
②接通电源，提前50min打开紫外光灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面上积累的微生物，30min后，关闭紫外光灯，开启送风机。
③超净工作台面上不要存放不必要的物品，以保证工作区内的洁净气流不受干扰。
④操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，封闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
⑤最后开启工作台紫外光灯，照射消毒30min后关闭，切断电源。
⑥按时用风速计丈量工作区的风速，若不符合技术标准，则应调节调压器手柄，改变风机输进电压，使超净工作台处于最佳状况。
⑦每月进行一次维护检查，并填写维护记录。
4）清洁
①每次使用完毕，立即清洁仪器，悬挂标识，并填写仪器使用记录。
②取样结束后，先用毛刷刷除洁净工作区的杂物和浮尘。
③用细软布擦拭超净工作台表面上的污迹、污垢，目测应无清洁剂残留，最后用清洁的布擦干。
④要经常用纱布蘸上酒精将紫外光灯表面擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌能力。
⑤效果评价：设备内外表面应该光亮整洁，没有污迹。
（2）超净工作台的使用注意事项
1）超净工作台是一台较精密的电气设备，对其进行经常性的保养和维护是非常重要的。首先要保持室内的干燥和清洁，因为潮湿的空气既会使材料锈蚀，也会影响电气电路的正常工作，另外潮湿的空气还利于细菌、霉菌的生长。清洁的环境还可延长滤板的使用寿命。
2）在使用超净工作台以前应开紫外光灯15min以上照射灭菌，但凡照射不到的地方仍会有细菌。紫外光灯开启较长时间后，可激发空气中的氧分子缔合臭氧分子。这种气体有很强的杀菌作用，可以对紫外线没有直接照射到的角落产生灭菌效果。由于臭氧有碍健康，在进入操作之前应先关掉紫外光灯，十几分钟后即可入内。
3）新购买的和久置未用的超净工作台除用紫外光灯等照射外，最好能进行熏蒸处理，然后在机器处于工作状态时，在操作区的四角及中心位置各放一个打开的营养琼脂平板，2h后盖上盖并置于37℃的培养箱中培养24h，计算出菌落数。平均每个平皿的菌落数必须少于0.5个。对于新安装的或长期未使用的超净工作台，使用前必须对其和周围环境先用超静真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
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