显微观察技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。借助于各种显微镜，人们不仅能观察到真菌、细菌的形态和构造，而且还能清楚地观察到病毒的形态和构造。利用显微镜，可以进行微生物形态的观察、微生物染色结果的鉴定、微生物数量的直接计数以及微生物大小的测量等工作。
显微镜的种类很多，在试验中常用的有普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。通常在观察细菌、放线菌以及真菌时，可以采用普通光学显微镜。普通光学显微镜的一般使用步骤如下：
1.光学显微镜的安装与调试
将显微镜置于平整的试验台上，保持镜座距试验台边缘3～4cm。切忌单手拎提，应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。镜检时姿势要端正，使用显微镜时双眼应同时睁开观察，既可减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图记录。
2.低倍镜观察物像
不同放大规格的物镜所达到的分辨率及放大率都是不同的。在进行显微观察时，应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察顺序，因低倍镜视野较大，易发现目标及确定检查的位置。
（1）调节光源 显微镜的照明光源有安装在镜座内的内置光源及通过反光镜采集的外置光源两种。内置光源可通过调节电压来获得适当的照明亮度。外置光源是指自然光或灯光，通常利用反光镜采集。使用反光镜时，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用凹面镜或平面镜，并避免直射光源，可通过调节角度使视野内的光线均匀、亮度适宜，以便于观察。
（2）调节目镜 常根据使用者的个人情况调整双筒显微镜的目镜间距。在左目镜上一般还配有屈光度调节环，适用于眼距不同或两眼视力有差别的观察者。
（3）调节聚光器数值孔径值 调节聚光器虹彩光圈值，使其与物镜的数值孔径值相符或略低。有些显微镜的聚光器只标有最大数值孔径值，而没有具体的光圈数刻度。使用这种显微镜时可在样品聚焦后取下一支目镜，从镜筒中一边观察，一边缩放光圈，调整光圈的边缘与物镜边缘黑圈相切或略小于其边缘。因为各物镜的数值孔径值不同，所以每转换一次物镜都应进行这种调节。
注意：在聚光器的数值孔径值确定后，若需改变光照强度，则可通过升降聚光器或改变光源的亮度来实现。
（4）放置标本 将载玻片标本置于载物台上，用标本夹固定，移动载物台使观察对象处在物镜正下方。首先，下降10倍物镜，使其接近标本，用粗调节器缓慢升起镜筒，使视野中的标本初步聚焦，然后用细调节器调节，使图像清晰；其次，通过移动载物台，认真观察标本各部位，按要求找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。
注意：在使用粗调节器聚焦物镜时，必须形成先从侧面注视，小心调节物镜靠近标本，然后用目镜观察，慢慢调节物镜离开标本进行聚焦的习惯，以免因一时大意而损坏镜头及标本。
3.高倍镜观察物像(www.xing528.com)
在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心，然后轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。从侧面观察，转动粗调节器，将镜筒徐徐放下，由目镜观察，仔细调节光圈，使光线明亮适宜，然后用粗调节器使镜筒缓慢上升至物像出现，再用细调节器调节至物像清晰，找到适宜观察部位并将其移至视野中心，准备用油镜观察。在对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后，微调细调节器使物像清晰，利用推进器移动标本，仔细观察并记录所观察到的结果。
注意：当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，此现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时，仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时的大意而损坏镜头或标本。
4.油镜进一步放大观察物像
在高倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器使镜筒升高，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域加香柏油，从侧面注视，转动粗调节器，缓慢降下镜筒，使油镜浸在香柏油中并接近标本。用目镜观察，进一步调节光线，转动粗调节器缓慢地提升油镜至物像出现，再用细调节器调节至物像清晰。如果油镜头已离开油面而仍未找到物像，则有两种可能：一是油镜下降还未到位；二是油镜上升过快。此时必须再从侧面观察，将油镜降下，重新操作。将聚光器升至最高位置并开足光圈，若所用聚光器的数值孔径值超过1.0，则还应在聚光镜与载玻片之间加香柏油，以保证其达到最大效能。
仔细观察细菌形态并绘图。
5.显微镜用毕后的处理
1）使镜筒上升，取下标本。
2）先用擦镜纸擦拭镜头上的香柏油，再蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，然后用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。擦镜头时要顺着镜头直径方向擦，不能沿圆周方向擦。最后用绸布擦净显微镜的金属部件。
注意：切忌用手或其他纸擦拭镜头，以免使镜头粘上污渍或产生划痕。
3）用擦镜纸清洁其他物镜及目镜。
4）将各部分还原，使反光镜垂直于镜座，将物镜转成“八”字形，再向下旋。同时把聚光镜降到最低位置，以免物镜与聚光镜发生碰撞。
5）染色载玻片标本上的香柏油可用二甲苯溶解，再用吸水纸轻轻压在涂片上，吸掉二甲苯和香柏油，以免损坏涂片。
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